[發明專利]原位化學發光底物和測定

有效

• 申請號: 201180043359.1
• 申請日: 2011-07-06
• 公開（公告）號: CN103209970A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: A.斯帕克斯;Z.王;M.吉
• 申請（專利權）人: 生命科技公司
• 主分類號: C07D305/00
• 分類號: C07D305/00;C07D305/14;C07F9/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 徐晶;權陸軍

1.一種用于產生光的方法，所述方法包括下述步驟：

(a)?提供氧化劑；

(b)?提供具有下述結構的烯醇醚：

其中，

A和B獨立地選自：含有1-20個碳原子的直鏈烷基、含有2-20個碳原子的直鏈烯基、含有3-20個碳原子的支鏈烷基、含有3-20個碳原子的支鏈烯基、含有3-20個碳原子的環烷基、含有3-20個碳原子的環烯基、含有3-20個碳原子的環雜烷基、含有3-20個碳原子的環雜烯基、含有4-60個碳原子的聚環烷基、含有4-60個碳原子的聚環烯基、含有4-60個碳原子的聚環雜烷基和含有4-60個碳原子的聚環雜烯基，它們中的任一個可以是未被取代的，或被一個或多個電子活性基團、增溶基團或光增強基團取代，且其中A和B一起形成所述環烷基、環烯基、聚環烷基或聚環烯基，所述環烷基、環烯基、聚環烷基或聚環烯基的碳原子之一是形成所述烯醇醚的雙鍵的2個碳原子中的一個，

R₁是含有1-20個碳原子的烷基、含有6-14個碳原子的芳基、含有7-15個碳原子的芳烷基、含有4-20個碳原子的雜芳基或含有5-20個碳的雜芳烷基，

T是能夠發射光的芳基或雜芳基環，且

R₂是酶可切割的基團，其含有可被酶部分切割以在T上產生氧陰離子的鍵；

(c)?組合水性溶液、所述氧化劑和所述烯醇醚，以形成包含1,2-二氧雜環丁烷酶底物的水性溶液；

(d)?提供酶復合物，所述酶復合物包含能夠切割所述1,2-二氧雜環丁烷酶底物的酶部分；

(e)?使所述酶復合物與所述包含1,2-二氧雜環丁烷酶底物的水性溶液接觸，以形成反應混合物；和，

(f)?使所述反應混合物產生光。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述氧化劑選自：過氧化氫、鉬酸鈉、過氧化氫和鉬酸鈉、次氯酸鹽、次氯酸鹽和過氧化氫、芳基內過氧化物、過氧化鈣過氧水合物以及它們的組合。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述氧化劑是過氧化氫、和過氧化氫和鉬酸鈉。

4.根據權利要求1所述的方法，其中A或B中的至少一個是

。

5.根據權利要求1所述的方法，其中A和B一起是

。

6.根據權利要求1所述的方法，其中R₁是含有1-2個碳原子的烷基或含有1-2個碳原子的三氟烷基。

7.根據權利要求1所述的方法，其中T是

其中，

R₃、R₄和R₅獨立地選自：H、F、Cl、Br、I、氰基、硝基、磺酸鹽、硫酸鹽、三氟甲基、三氟乙基、含有1-20個碳原子的直鏈烷基、含有3-20個碳原子的支鏈烷基、含有2-20個碳原子的直鏈烯基、含有3-20個碳原子的支鏈烯基、含有3-20個碳原子的環烷基、含有3-20個碳原子的環烯基、含有3-20個碳原子的環雜烷基、含有3-20個碳原子的環雜烯基、含有4-60個碳原子的聚環烷基、含有4-60個碳原子的聚環烯基、含有4-60個碳原子的聚環雜烷基、含有4-60個碳原子的聚環雜烯基、含有1-20個碳原子的烷氧基、含有6-14個碳原子的芳基、含有6-14個碳原子的芳氧基、含有2-21個碳原子的酯、含有3-30個碳原子的三烷基銨、含有3-30個碳原子的三烷基鏻、含有2-21個碳原子的烷基酰氨基、含有7-15個碳原子的芳基酰氨基、含有2-21個碳原子的烷基氨甲酰基、含有7-15個碳原子的芳基氨甲酰基、含有1-20個碳原子的烷基亞磺酰氨基、含有6-14個碳原子的芳基亞磺酰氨基、含有3-60個碳原子的三烷基甲硅烷基、含有18-42個碳原子的三芳基甲硅烷基、含有7-32個碳原子的烷基芳基甲硅烷基、含有1-20個碳原子的烷基酰氨基磺酰基、含有6-14個碳原子的芳基酰氨基磺酰基、含有1-20個碳原子的烷基磺酰基、含有6-14個碳原子的芳基磺酰基、含有2-20個碳原子的烷硫基和含有6-14個碳原子的芳硫基，且

X是硫原子、氧原子或氮原子。