[發(fā)明專利]用于工業(yè)規(guī)模分散的生物基質(zhì)支架

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201180042690.1
• 申請(qǐng)日: 2011-07-01
• 公開（公告）號(hào): CN103491898A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: M·L·羅亞奇;R·H·馬拉瓦卡;Y·王;L·C·M·里德
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北卡羅來納-查佩爾山大學(xué);吉加塞特有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): A61F2/02
• 分類號(hào): A61F2/02;A61F2/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 劉健;梁謀

1.由生物組織產(chǎn)生生物基質(zhì)支架的方法，所述生物基質(zhì)支架用于工業(yè)規(guī)模分散至培養(yǎng)裝置上，其包括：

a)以包含約3.5M?NaCl至約4.5M?NaCl的鹽濃度的緩沖液灌注所述生物組織或使所述生物組織均質(zhì)化；然后

b)在第一培養(yǎng)液中以包含脂肪酶和/或去污劑的脫脂緩沖液灌注步驟(a)的生物組織或提取步驟(a)的勻漿，其中所述第一培養(yǎng)液的重量摩爾滲透壓濃度是約250mOsm/kg至約350mOsm/kg，并且所述第一培養(yǎng)液是無血清的且處于中性pH；然后

c)用處于中性pH且包含約2.0M?NaCl至約5.0M?NaCl的鹽濃度的緩沖液灌注步驟(b)的組織或提取步驟(b)的勻漿，選擇所述濃度以保持所述生物組織中鑒定的膠原不溶；然后

d)在緩沖液中用RNase和DNase灌注步驟(c)的組織或提取步驟(c)的勻漿；以及然后

e)用處于中性pH、無血清、且具有約250mOsm/kg至約350mOsm/kg的重量摩爾滲透壓濃度的第二培養(yǎng)液沖洗步驟(d)的組織或勻漿，

進(jìn)而從所述生物組織產(chǎn)生完整的或均質(zhì)化的生物基質(zhì)支架，所述生物組織支架包含所述生物組織的至少95％的膠原和大部分膠原結(jié)合基質(zhì)成分以及基質(zhì)結(jié)合生長因子、激素和細(xì)胞因子；

f)在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中稀釋所述生物基質(zhì)支架；

g)在約-80℃冷凍(f)的生物基質(zhì)支架；

h)通過低溫研磨將(g)的生物基質(zhì)支架粉碎為約1μm至約100μm大小范圍的生物基質(zhì)顆粒；

i)在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中懸浮解凍(h)的生物基質(zhì)顆粒；以及

j)將步驟(i)的生物基質(zhì)顆粒分散至培養(yǎng)裝置上，進(jìn)而從生物組織產(chǎn)生生物基質(zhì)支架，所述生物基質(zhì)支架用于工業(yè)規(guī)模分散至培養(yǎng)裝置上。

2.權(quán)利要求1的方法，還包括對(duì)所述生物基質(zhì)支架消毒的步驟。

3.權(quán)利要求3的方法，其中所述消毒步驟通過伽馬輻射來進(jìn)行。

4.權(quán)利要求1的方法，其中(f)的生物基質(zhì)支架以約1∶6比例稀釋于所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中。

5.權(quán)利要求1的方法，其中(i)的生物基質(zhì)顆粒以約1∶24比例稀釋于所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中。

6.權(quán)利要求1的方法，其中所述第一培養(yǎng)液包含鹽、礦物質(zhì)、氨基酸、維生素和糖。

7.權(quán)利要求1的方法，其中所述第一培養(yǎng)液是基礎(chǔ)培養(yǎng)液。

8.權(quán)利要求7的方法，其中所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液選自由RPMI?1640、DME/F12、DME、F12、Waymouth培養(yǎng)液以及William培養(yǎng)液組成的群組。

9.權(quán)利要求1的方法，其中所述第二培養(yǎng)液包含組織液中所存在組分的至少一種。

10.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(b)的所述脫脂緩沖液包含第一培養(yǎng)液中約20單位/L至約50單位/L的磷脂酶A2和約1％的脫氧膽酸鈉。

11.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(c)的所述緩沖液的鹽濃度在用于從成體肝臟制備支架時(shí)為約3.4M?NaCl至約3.5M?NaCl，以及在用于從胎兒肝臟制備支架時(shí)為約4.0M?NaCl至約4.5M?NaCl。

12.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(c)的所述緩沖液還包含蛋白酶抑制劑。

13.權(quán)利要求12的方法，其中所述蛋白酶抑制劑是大豆胰蛋白酶抑制劑。

14.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(d)的所述緩沖液還包含蛋白酶抑制劑。

15.權(quán)利要求13的方法，其中所述蛋白酶抑制劑是大豆胰蛋白酶抑制劑。

16.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(a)至(e)的所有培養(yǎng)液和緩沖液中沒有可檢測(cè)量的使細(xì)胞外基質(zhì)成分降解的酶。

17.權(quán)利要求1的方法，其中所述生物組織選自由肝臟組織、肺臟組織、胰臟組織、甲狀腺組織、腸組織、皮膚組織、血管組織、膀胱組織、心臟組織和腎臟組織組成的群組。

18.權(quán)利要求1的方法，其中所述生物組織來自哺乳動(dòng)物。

19.通過權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法產(chǎn)生的生物基質(zhì)支架。