[發明專利]胰島的分離方法及用于保護胰島組織的保護液

有效

• 申請號: 201180034132.0
• 申請日: 2011-07-13
• 公開（公告）號: CN102985532A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 種村匡弘;澤芳樹;名井陽;伊藤壽記;森正樹;土岐祐一郎
• 申請（專利權）人: 株式會社大塚制藥工場
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N9/99;C12N9/50
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 楊宏軍;王大方

技術領域

本發明涉及從胰臟分離能夠移植的胰島的方法及在該分離方法中用于保護胰島組織的保護液。

背景技術

1型糖尿病的根治方法例如有從腦死亡者移植胰臟本身的胰臟移植。所述胰臟移植僅通過1次移植就能脫離胰島素等，效果好。但是，外科手術復雜、而且伴隨血液循環再建，也可能引起并發癥，因此存在對患者身體造成很大負擔的問題。因此，近年來，胰島移植作為新的糖尿病根治方法受到關注。所謂胰島移植，是將作為調節血糖的激素的胰島素或胰高血糖素的分泌組織即胰島從胰臟分離，將分離的胰島從門靜脈向肝臟移植的方法。被移植的胰島成活在肝臟內的門靜脈末端，由此分泌胰島素。

現有的胰臟移植為伴有高侵襲性的外科處置，與此相對，該胰島移植是在門靜脈留置導管，按照靜脈滴注的要領移植胰島進行處置即可，因此與胰臟移植相比，患者身體的負擔較輕并且安全。另外，胰島移植與其他臟器移植不同，其為細胞移植的一種，因此能夠將胰島半永久地冷凍保存。進而，胰島移植時還存在下述優點：即使發生排斥反應，由于移植的胰島本身被吸收，所以也無需更換摘除細胞。

另一方面，胰島移植存在下述缺點，即，由于從胰臟僅分離胰島細胞在技術上的困難性，所以不能獲得適合移植的充分產量的胰島。結果，需要多次的移植才能實現胰島素脫離，需要接受來自平均2.6人的供體的胰臟提供。因此，如何能夠從胰臟更多地獲得質量優異的胰島成為課題。

為了解決該課題，一直以來研究了各種胰島分離方法。例如，專利文獻1中公開了特征在于將含有蛋白酶抑制劑的保護液預先注入胰管內的胰島的分離方法。該胰島的分離方法中的蛋白酶抑制劑用于提高胰島的產量。

在現有的胰島分離方法中，不能得到質量及產量充分的胰島的原因如非專利文獻1所公開的那樣，是因為存在于胰臟內的來自胰外分泌腺的內源酶由于胰臟的摘出而被活化，損傷胰臟組織，之前的胰島分離方法通過采取抑制內源酶活性的手段，以求改善胰島的質量及產量。來自胰外分泌腺的酶有胰蛋白酶、來自胰的彈性蛋白酶、糜蛋白酶等，上述專利文獻1中使用特異性抑制胰蛋白酶的烏司他丁。

專利文獻1中指出，作為通過蛋白酶抑制劑適當地保護胰島的組織的結果，胰島的產量增大。但是，現有的方法在分離的過程中胰島細胞被撕裂等、通常受到物理損傷，不能以必要的產量穩定地獲得在移植后分泌充分的胰島素的大小和形狀的胰島。另外，專利文獻1中，用作蛋白酶抑制劑的烏司他丁是以人尿作為原料的生物來源制劑，也存在對于生物體的風險高、缺乏安全性的問題。

專利文獻1：國際公開第2006/068226號

非專利文獻1：Transplantation?Proceedings，2003，Vol.35，no.7，2455-7

發明內容

因此，本發明的目的在于提供一種胰島的分離方法及用于保護胰島組織的保護液，所述胰島的分離方法能夠以高產量獲得適合移植的形狀及大小的胰島。

本發明人等在進行本發明時，新發現了若供體的嗜中性粒細胞事先浸潤在摘出后的胰臟內，經過消化的工序，則其數量增加，并且從該嗜中性粒細胞釋放的嗜中性粒細胞彈性蛋白酶對胰島造成損傷。因此，發明人等著眼于通過抑制所述嗜中性粒細胞彈性蛋白酶的作用能有效地遏制胰島的損傷，從而完成了本發明。

本發明涉及以下內容。

[1]一種胰島的分離方法，包括下述工序：

將摘出的胰臟破壞得到胰組織的消化工序；和

將上述胰組織浸漬在純化溶液中得到胰島的純化工序，

其特征在于，上述消化工序包括下述步驟：

將含有消化酶的酶溶液注入上述胰臟的內部的酶注入步驟；

使上述消化酶活化的消化開始步驟；

使上述消化酶失活的消化停止步驟；和

將已被破壞的胰組織回收的回收步驟，

通過在上述消化開始步驟之前添加嗜中性粒細胞彈性蛋白酶抑制劑，從而在開始上述消化開始步驟的時刻，使嗜中性粒細胞彈性蛋白酶抑制劑存在于上述胰臟的內部。

[2]如[1]所述的胰島的分離方法，其特征在于，在上述消化工序之前，還包括向摘出的胰臟的胰管內注入保存液的注入工序及/或將上述胰臟浸漬在浸漬液中進行保存的保存工序。

[3]如[1]或[2]所述的胰島的分離方法，其特征在于，上述嗜中性粒細胞彈性蛋白酶抑制劑的添加通過向上述酶溶液中添加嗜中性粒細胞彈性蛋白酶抑制劑來進行。