[發(fā)明專利]HMGB1作為炎性腸病病情的生物標志物的用途、其在糞便樣品中的非侵入性檢測方法及其試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201180032762.4
• 申請日: 2011-08-01
• 公開（公告）號: CN103069276A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設計）人: S·卡西亞拉;L·斯特納蒂;R·維塔里
• 申請（專利權）人: D.M.G.意大利有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 袁逸

描述

本發(fā)明與檢測和診斷人慢性炎性腸病(IBD“炎性腸病”)的材料和方法有關。尤其，本發(fā)明描述了一種通過糞便提取物中HMGB1蛋白的存在來測定人炎性腸病病情、以及該蛋白質與慢性炎性腸病特別是克羅恩病(CD)和潰瘍性結腸炎(UC)發(fā)病機理的牽連的非侵入性方法。本發(fā)明還包括用于實現(xiàn)該方法的比色試劑盒。

發(fā)明領域

高遷移率族蛋白1(HMGB1)是一種與非組蛋白染色質相關聯(lián)的非組蛋白核蛋白質，表現(xiàn)為能夠通過誘導炎癥反應來應答組織損傷的刺激(1)的DAMP(傷害相關分子模式)分子原型。HMGB1在諸如LPS、TNFα、IL-1β、IL-6和IL-8(4)之類的促炎癥刺激后由巨噬細胞(2)和腸上皮細胞(3)主動分泌，并且它由壞死細胞而非凋亡細胞釋放(5)。分泌至胞外空間的HMGB1與以下不同的分子形成高炎癥復合體：單鏈DNA、LPS、IL-1β和核小體，其與它們各自的受體諸如TLR9、TLR4、IL-1R和TLR2相互作用，激活固有免疫。另外，HMGB1可結合糖基化最終產(chǎn)物受體RAGE(高級糖基化最終產(chǎn)物受體)，但不形成復合體(6)。

胞外HMGB1誘導炎癥介質的產(chǎn)生(4)，并可能在自身免疫性疾病或炎性疾病的發(fā)病機理中扮演重要角色，這些疾病包括類風濕性關節(jié)炎(7)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(8)和多發(fā)性肌炎(9)。美國專利No.6,303,321描述的發(fā)明涉及治療敗血癥的藥物組合物。該藥物組合物包括作為活性物質的有效量的HMGB1拮抗劑或抑制劑。在HMGB1的拮抗劑中，優(yōu)選使用結合HMGB1蛋白的抗體、HMGB1編碼基因的反義序列、及HMGB1受體的拮抗劑。因此，該發(fā)明的主題還有治療敗血癥的方法，包括施用有效量的HMGB1拮抗劑。該發(fā)明還提供了一種診斷和預后方法，用于監(jiān)測患者病情的嚴重程度和預測具有休克樣癥狀或顯示相關聯(lián)癥狀的患者的敗血癥及相關病情的可能臨床病程。該診斷和預后方法包括測定樣品中特別是在血清或全血中HMGB1蛋白的濃度，將其與HMGB1標準濃度比較。較高水平的HMGB1是預后不良或可能發(fā)生毒性反應的指標。該診斷方法也可應用于其他組織或液體空間例如腦脊液或尿液。

HMGB1和胃腸道：技術發(fā)展水平

壓力、組織損傷或腸粘膜微生物抗原癥狀激活參與固有免疫應答的細胞，例如巨噬細胞和樹突狀細胞，從而引發(fā)炎癥反應。

隨炎癥刺而激釋放到細胞外基質的HMGB1的存在似乎通過改變腸道上皮細胞的滲透性和導致微生物抗原進入的增多來顯著影響腸屏障功能。事實上，體外和體內的研究已將由受免疫刺激的腸上皮細胞或由其他免疫細胞分泌的HMGB1的存在與腸屏障功能障礙關聯(lián)起來(10-15)。此外，由于炎癥細胞因子的釋放，HMGB1也潛在地參與結腸炎癥，正如在動物模型中(16，17)、以及在結腸炎的壞死性形式(18，19)中所證實的。

通過抗HMGB1分子來減少所分泌的HMGB1似乎與腸屏障損壞和粘膜炎癥兩者的改善皆相關(11，13，14，16，19，20)。

從患者獲得的組織樣本中的HMGB1蛋白的存在和量已經(jīng)被用作腸道癌癥特別是結腸和直腸癌癥的診斷和預后標志物，正如在美國專利申請2006/0188883中描述。然而，眾所周知，癌癥疾病是一種與炎性腸病非常不同的病情。此外，該專利申請的目標是只在生物組織的使用中適用，并沒有提供與糞便材料的使用有關的參考。

在最近一篇由Davè等所著的文章(16)中顯示了在有慢性結腸炎的小鼠模型中使用抗炎劑如丙酮酸乙酯以減少HMGB1分泌的結果。對糞便樣品進行的測試表明施用丙酮酸乙酯后大便中HMGB1水平降低。

但是，Davè對結腸炎的研究中進行的實驗僅提到了小鼠模型，而且已知這樣得到的結果并非總是能夠自動擴展到人及其疾??；事實上，通過使用動物模型得到的結果經(jīng)常與相應的人類疾病完全不一致，在分子標記物方面、在疾病的臨床病程以及在對具體治療的應答方面皆是如此。

此外，在該研究中使用的小鼠模型還采用了轉基因的小鼠品系，其對于IL-10即一抗炎細胞因子的基因編碼被刪除了，這導致小鼠的結腸炎。這與人類疾病相比是一種頗為不同的狀態(tài)，在人類疾病中是由復雜得多的促成因素決定了疾病的發(fā)作。

事實上，眾所周知，在實驗室動物模型中絕對無法再現(xiàn)表征人類的遺傳和環(huán)境易變性。特別是，炎性腸病是多因素疾病，其中遺傳和環(huán)境易變性在疾病的發(fā)作和發(fā)展中扮演重要角色。