[發(fā)明專(zhuān)利]分離Tr1細(xì)胞的新方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201180029496.X
• 申請(qǐng)日: 2011-04-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102947702A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阿爾諾·福薩特;瓦萊麗·布魯恩;納薩莉·貝爾蒙特;埃爾韋·巴斯蒂安;布里吉特·夸坦尼恩斯
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 特克賽爾公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/50
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/50;C12N5/0783
• 代理公司: 北京派特恩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11270
• 代理人: 武晨燕;遲姍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于鑒別和/或分離Tr1細(xì)胞、休眠Tr1細(xì)胞和/或活化Tr1細(xì)胞的方法，經(jīng)過(guò)富集的Tr1細(xì)胞、休眠Tr1細(xì)胞和/或活化Tr1細(xì)胞的群體，去除Tr1細(xì)胞、休眠Tr1細(xì)胞和/或活化Tr1細(xì)胞的群體，以及用于診斷或治療慢性炎癥性疾病、自身免疫疾病、過(guò)敏性疾病、癌癥和器官移植病癥的方法和試劑盒。

背景技術(shù)

免疫系統(tǒng)的體內(nèi)平衡依賴(lài)于針對(duì)入侵病原體的免疫應(yīng)答與針對(duì)自身抗原的免疫耐受之間的平衡。中樞和外周耐受都是用于誘導(dǎo)和維持T細(xì)胞耐受的重要機(jī)制。在過(guò)去的十年里，已經(jīng)對(duì)在維持外周免疫耐受方面扮演重要角色的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)給予了眾多關(guān)注。現(xiàn)在已經(jīng)公認(rèn)Treg可以分成兩種不同的亞型：天然Treg(nTreg)和誘導(dǎo)型Treg群體，例如TGF-β誘導(dǎo)的Treg細(xì)胞、Tr1細(xì)胞或Th3細(xì)胞。因?yàn)檫@些Treg群體在外周免疫耐受中扮演重要角色，所以能夠鑒別、分離或富集這些不同的Treg亞組以便促進(jìn)對(duì)于免疫病癥(例如慢性炎癥性疾病、自身免疫疾病或過(guò)敏性疾病)的診斷、評(píng)估或治療已經(jīng)變成一個(gè)關(guān)鍵議題。

舉例來(lái)說(shuō)，自nTreg被鑒別以來(lái)，其一直是通過(guò)CD25的表達(dá)來(lái)進(jìn)行鑒別。然而，CD25也是常規(guī)T細(xì)胞(convT)的一種活化標(biāo)志物，因此不是Treg細(xì)胞所專(zhuān)有的。通過(guò)鑒別例如Foxp3、CD127(WO2007140472)、CD45RA(WO2007/117602)、CD?134(WO2009/036521)和CD49d(WO2009/047003)等細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志物已經(jīng)在人類(lèi)nTreg的辨別方面取得了最新進(jìn)展。關(guān)于Tr1細(xì)胞，其特異性鑒別仍然存在困難且主要基于IL-10分泌辨別。因此需要提供用于更好地且更精確地辨別Tr1細(xì)胞的方式。

此外，Tr1細(xì)胞已被證實(shí)可用于細(xì)胞療法中，Tr1細(xì)胞注射入患有克羅恩病(Crohn’s?disease)的患者體內(nèi)以改善其狀況。鑒于Tr1細(xì)胞在細(xì)胞療法中的用途，因此需要更精確地鑒別和分離Tr1細(xì)胞。

發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可使用CD127和CD62L細(xì)胞表面標(biāo)志物特異性地鑒別Tr1細(xì)胞。實(shí)際上，除CD4標(biāo)志物和任選的CD25標(biāo)志物以外，另外使用CD127和CD62L這兩種標(biāo)志物允許在常規(guī)的休眠和活化T細(xì)胞以及休眠和活化nTreg中辨別Tr1細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是一種鑒別Tr1細(xì)胞群體的方法，其包含檢測(cè)細(xì)胞群體上的CD4、CD127和CD62L標(biāo)志物的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)：

-CD4和

-低水平的CD127，和

-低水平的CD62L，

的細(xì)胞是Tr1細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種鑒別休眠Tr1細(xì)胞群體的方法，其包含檢測(cè)細(xì)胞群體上的CD4、CD25、以及CD127和CD62L標(biāo)志物中至少一種的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)：

-CD4和

-低水平的CD127和CD62L中的至少一種，

且不表達(dá)：

-CD25，

的細(xì)胞是休眠Tr1細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種鑒別休眠Tr1細(xì)胞群體的方法，其包含檢測(cè)細(xì)胞群體上的CD4、CD25、CD127和CD62L標(biāo)志物的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)：

-CD4和

-低水平的CD127，

-低水平的CD62L，

且不表達(dá)：

-CD25，

的細(xì)胞是休眠Tr1細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種鑒別活化Tr1細(xì)胞群體的方法，其包含檢測(cè)細(xì)胞群體上的CD4、CD25、CD127和CD62L標(biāo)志物的細(xì)胞表面表達(dá)，其中表達(dá)：

-CD4，

-CD25，

-低水平的CD127，和

-低水平的CD62L，

的細(xì)胞是活化Tr1細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種用于分離休眠或活化Tr1細(xì)胞群體的方法，其包含如上所述鑒別休眠Tr1細(xì)胞群體或活化Tr1細(xì)胞群體，和分離所述群體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種分離的休眠Tr1細(xì)胞或活化Tr1細(xì)胞群體，其是通過(guò)如上所述的方法獲得。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種經(jīng)過(guò)分離的Tr1細(xì)胞群體，其是通過(guò)如上所述的方法獲得。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種經(jīng)過(guò)分離的休眠Tr1細(xì)胞群體，其是通過(guò)如上所述的方法獲得。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是一種經(jīng)過(guò)分離的活化Tr1細(xì)胞群體，其是通過(guò)如上所述的方法獲得。