[發明專利]纖維二糖水解酶變體及編碼其的多核苷酸

有效

• 申請號: 201180027233.5
• 申請日: 2011-03-29
• 公開（公告）號: CN102918151A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: M.沃古利斯
• 申請（專利權）人: 諾維信股份有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 謝夢欣

1.一種親本纖維二糖水解酶的分離的變體，其在對應于SEQ?ID?NO:2的位置254、285、286、330、342和360的一個或多個(幾個)位置包含取代，其中所述變體具有纖維二糖水解酶活性。

2.權利要求1的變體，其中所述親本纖維二糖水解酶是：

(a)多肽，其與SEQ?ID?NO:2的成熟多肽具有至少60%序列同一性；

(b)多肽，其由多核苷酸編碼，所述多核苷酸在低嚴格條件下與以下雜交：(i)SEQ?ID?NO:1的成熟多肽基因組編碼序列，(ii)包含于SEQ?ID?NO:1的成熟多肽cDNA編碼序列，或(iii)(i)或(ii)的全長互補鏈；

(c)多肽，其由多核苷酸編碼，所述多核苷酸與SEQ?ID?NO:1的成熟多肽基因組編碼序列，或包含于SEQ?ID?NO:1的成熟多肽cDNA編碼序列具有至少60%同一性；或

(d)SEQ?ID?NO:2的成熟多肽的片段，其具有纖維二糖水解酶活性。

3.權利要求1或2的變體，其中所述親本纖維二糖水解酶包含SEQ?IDNO:2的成熟多肽或由SEQ?ID?NO:2的成熟多肽組成。

4.權利要求1-3任一項的變體，其中對應于位置254的取代是用Leu的取代，對應于位置285的取代是用Ile的取代，對應于位置286的取代是用Gln的取代，對應于位置330的取代是用Asn的取代，對應于位置342的取代是用Phe的取代，而對應于位置360的取代是用Gly的取代。

5.權利要求1-3任一項的變體，其中對應于位置254的取代是C254L，對應于285的取代是L285I，對應于位置286的取代是G286Q，對應于位置330的取代是D330N，對應于位置342的取代是M342F，而對應于位置360的取代是S360G。

6.權利要求1-5任一項的變體，進一步在對應于SEQ?ID?NO:2的位置245、382、420、437和440的一個或多個(幾個)位置包含取代。

7.權利要求6的變體，其中對應于位置245的取代是用Ser的取代，對應于位置382的取代是用Cys的取代，對應于位置420的取代是用Ile的取代，對應于位置437的取代是用Gln的取代，對應于位置440的取代是用Cys的取代。

8.權利要求6的變體，其中對應于位置245的取代是A245S，對應于位置382的取代是G382C，對應于位置420的取代是L420I，對應于位置437的取代是T437Q，而對應于位置440的取代是Q440C。

9.權利要求1-8任一項的變體，其相對于親本纖維二糖水解酶具有改善的熱穩定性。

10.權利要求2-9任一項的變體，其中SEQ?ID?NO:2的成熟多肽是SEQ?IDNO:2的氨基酸20-454。

11.權利要求2-9任一項的變體，其中SEQ?ID?NO:1的成熟多肽編碼序列是SEQ?ID?NO:1的核苷酸58-1710。

12.一種具有纖維二糖水解酶活性的分離的多肽，其中所述多肽：

(a)與SEQ?ID?NO:2的成熟多肽具有至少60%序列同一性；

(b)由多核苷酸編碼，所述多核苷酸在低嚴格條件下與以下雜交：(i)SEQID?NO:1的成熟多肽基因組編碼序列，(ii)包含于SEQ?ID?NO:1的成熟多肽cDNA編碼序列，或(iii)(i)或(ii)的全長互補鏈；

(c)由多核苷酸編碼，所述多核苷酸與SEQ?ID?NO:1的成熟多肽基因組編碼序列或包含于SEQ?ID?NO:1的成熟多肽cDNA編碼序列具有至少60%同一性；或

(d)是SEQ?ID?NO:2的成熟多肽的片段；

且其中多肽氨基酸序列的一個或多個(幾個)位置與SEQ?ID?NO:2的相應位置254、285、286、330、342和360不同。