[發明專利]用于活化和綴合生物分子的方法

有效

• 申請號: 201180020149.0
• 申請日: 2011-02-21
• 公開（公告）號: CN102970988A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: J.H.沃格爾;杜志崇;C.L.比安科
• 申請（專利權）人: 拜耳醫藥保健有限公司
• 主分類號: A61K31/00
• 分類號: A61K31/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

發明領域

本發明涉及用于生成生物分子綴合物的方法，其中將該方法整合入單一單元操作(single?unit?operation)中。

發明背景

隨著生物技術的進展，已經開發出生物藥物來滿足未滿足的醫學需要。然而，其短的體內半衰期需要患者服用頻繁和/或大劑量的這些生物藥物來實現靶標治療或預防目的。長的靜脈內療法或頻繁的注射可以影響患者的生命質量。多種聚合物諸如聚乙二醇(PEG)可以與生物分子(例如，蛋白質)綴合以提高許多生物分子的半衰期和生物活性(Reddy,Ann.Pharmacother.34:915-923,2000)。聚合物綴合物的其它益處包括(a)在制造過程期間改善的產品穩定性；(b)降低的腎清除(Fung等,Polym.Prepr.38:565-566,1997)；改善的腫瘤靶向(Yowell等,Cancer?Treat.Rev.28Suppl.A:3-6,2002)；降低的抗原性和免疫原性(Muller等,Br.J.Haematol.110:379-384,2000;Abshire等,Blood96:1709-1715,2000)；和更大的可耐受性(Safra等,Ann.Oncol.11:1029-1033,2000;Judson等,Eur.J.Cancer?37:870-877,2001)。PEG化已經應用于人生長因子(Kim等,Biomaterials?23:2311-2317,2002;Wu等,Protein?Expr.Purif.48:24-27,2006)、生長激素釋放因子(Piquet等,J.Chromatogr.944:141-148,2002)、腺病毒載體(Eto等,Int.J.Pharm.354:3-8,2008)和質粒DNA(Hosseinkhani等,J.Control?Release,97:157-171,2004)。由于PEG化的益處，已經開發出許多綴合反應化學(Roberts等.,Adv.Drug?Deliv.Rev.54:459-476,2002)和聚合物衍生物(歐洲專利No.1578841)。隨著生物分子-聚合物綴合物的應用增加，有必要開發簡單的、可再現的、且可縮放的(scalable)單元操作來滿足制造需要。

發明概述

本發明涉及一種用于生成生物分子綴合物的方法，包括下列步驟：通過與活化劑接觸活化生物分子；除去所述活化劑；并通過將所述生物分子與活化的聚合物起反應綴合所述生物分子；其中將該方法的步驟整合入單一單元操作中。該方法可以進一步包括分開所述生物分子綴合物與未綴合的生物分子的步驟。在一個實施方案中，通過大小排阻層析或離子交換層析分開所述生物分子綴合物與未綴合的生物分子。

在一個實施方案中，單一單元操作是集成的切向流過濾系統。在另一個實施方案中，活化劑選自緩沖液更換、pH調節、或還原劑。在又一個實施方案中，還原劑是二硫蘇糖醇或三2-羧乙基膦(tris?2-carboxyethyl?phosphine)。在其它實施方案中，聚合物是聚乙二醇，且生物分子選自：蛋白質、多糖和核酸。在又一個實施方案中，所述蛋白質選自凝固因子、抗體、激素、生長因子和酶。

附圖簡述

圖1：PEG化對照運行的陽離子交換層析洗脫譜(profile)。

圖2：來自PEG化對照運行的陽離子交換層析洗脫峰的SDS-PAGE。

圖3：來自PEG化對照的陽離子交換層析洗脫峰的大小排阻層析。

圖4：以TFF模式實施的PEG化的陽離子交換層析洗脫譜。

圖5：實驗室規模TFF運行的陽離子交換層析洗脫譜。

圖6：由實驗室規模TFF運行生成的PEG化rFVIII的SEC譜。

圖7：試驗(pilot)規模TFF運行的陽離子交換層析洗脫譜。

發明詳述

應當理解，本發明不限于所描述的具體裝置或部分，并且因此可以有所變化。還應當理解，本文中所使用的術語僅為了描述具體的實施方案，而并不意圖限制本發明的范圍，其僅由所附權利要求書限制。

必須注意到，如本文中和所附權利要求書中所使用的，單數形式“一個”、“一種”和“該/所述”包括復數提及物，除非上下文另有明確規定。如此，例如，提及“藥劑”指提及一種或多種藥劑(agent)，并且包括本領域技術人員已知的其等同物，等等。除非另有定義，本文中所使用的所有技術和科學術語與本發明所屬領域普通技術人員的通常理解具有相同的意義。