[發(fā)明專利]不溶性目標(biāo)蛋白質(zhì)的分離

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201180017588.6
• 申請日: 2011-03-30
• 公開（公告）號: CN102844326B
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬丁·施密特;阿克塞爾·萊默爾;林·勒默爾
• 申請（專利權(quán)）人: 安西爾克公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K14/435
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11227
• 代理人: 彭鯤鵬,盧蓓

1.從完整或破碎宿主細(xì)胞懸液中純化不溶性目標(biāo)絲蛋白的方法，其包括以下步驟：

a)提供包含不溶性目標(biāo)絲蛋白和不溶性宿主細(xì)胞部分的完整或破碎宿主細(xì)胞懸液，

b)將至少一種堿的水溶液添加至所述懸液中，其中所述堿的量足以破碎所述宿主細(xì)胞和/或溶解所述不溶性宿主細(xì)胞部分，以及

c)將所述不溶性目標(biāo)絲蛋白從所述溶解的不溶性宿主細(xì)胞部分中純化出來，

其中在步驟b)中至少80％的所述不溶性宿主細(xì)胞部分被溶解，

其中所述不溶性目標(biāo)絲蛋白在整個純化過程中保持不溶，并且

其中所述至少一種堿是金屬氫氧化物或氨。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述宿主細(xì)胞為細(xì)菌、酵母、植物或昆蟲宿主細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述經(jīng)純化的不溶性目標(biāo)絲蛋白的純度為至少80％。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述經(jīng)純化的不溶性目標(biāo)絲蛋白的純度為至少90％。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述經(jīng)純化的不溶性目標(biāo)絲蛋白的純度為至少95％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述金屬氫氧化物選自氫氧化鈉(NaOH)、氫氧化鉀(KOH)和氫氧化鈣(Ca(OH)₂)，或其組合。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述堿為氫氧化鈉(NaOH)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(b)中所述堿的最終濃度為0.005M至1M。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中步驟(b)中所述堿的最終濃度為0.01M至0.6M。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中步驟(b)中所述堿的最終濃度為0.02M至0.2M。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中步驟(b)中所述堿的最終濃度為0.04M至0.06M。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法還包括在步驟b)之前、步驟b)中和/或步驟b)之后添加至少一種試劑(i)。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述試劑選自變性劑、kosmotropic劑和去污劑，或其組合。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中

(i)所述變性劑為尿素(CH₄N₂O)或鹽酸胍(CH₅N₃HCl)，

(ii)所述kosmotropic劑為磷酸鹽或硫酸鹽，或者

(iii)所述去污劑為吐溫20、Triton X-100、SDS或Brij。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中

(i)所述尿素的最終濃度為0.1M至10M，或者

(ii)所述鹽酸胍的最終濃度為0.01M至3M。

16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中

(i)所述尿素的最終濃度為1M至5M，或者

(ii)所述鹽酸胍的最終濃度為0.1M至2M。

17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟c)中所述不溶性目標(biāo)絲蛋白與所述溶解的不溶性宿主細(xì)胞部分的所述分離通過離心、沉降和/或過濾來實現(xiàn)。

18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法還包括步驟b)之后和步驟c)之前的步驟b’)，其使所述懸液進(jìn)行均化。

19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述步驟還包括步驟c)之后的步驟d)，其用水溶液、有機溶液和/或尿素洗滌所述經(jīng)純化的不溶性目標(biāo)絲蛋白。

20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述有機溶液包含乙醇(EtOH)、甲醇(CH₃OH)、己烷(C₆H₁₄)、乙醚(C₄H₁₀O)和/或異丙醇(C₃H₈O)。