[發(fā)明專(zhuān)利]新型雙歧桿菌屬細(xì)菌的制作方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201180010882.4
• 申請(qǐng)日: 2011-02-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102770528A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 左古知行;三浦美加;島川康久;宮崎幸司;藤本淳治;渡邊幸一
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 株式會(huì)社益力多本社
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;A23C9/127;A23L1/30;A23L2/02;C12N15/09;C12Q1/04;C12Q1/06
• 代理公司: 北京尚誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及新型雙歧桿菌屬細(xì)菌的制作方法、根據(jù)本制作方法得到的新型雙歧桿菌屬細(xì)菌和該細(xì)菌的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

雙歧桿菌屬細(xì)菌是人體腸內(nèi)細(xì)菌菌落中的主要細(xì)菌，已知具有便秘、腹瀉的改善性等的整腸作用、血清膽固醇上升抑制作用、免疫活化作用等對(duì)人體健康有益的作用。因此，以各種發(fā)酵飲食品、活菌制劑等的形態(tài)有多種市售品出售，特別是發(fā)酵乳飲食品，具有優(yōu)異的嗜好性，因此，適于雙歧桿菌屬細(xì)菌的持續(xù)攝取。

雙歧桿菌屬細(xì)菌是專(zhuān)性厭氧菌，對(duì)氧、低pH、高酸度敏感，發(fā)酵飲食品中制造時(shí)的增殖、保存時(shí)的存活性等操作困難的點(diǎn)很多。為了得到雙歧桿菌屬細(xì)菌的生理效果，認(rèn)為必須要使盡可能多的菌活著到達(dá)腸道，特別是提高飲食品中的菌的存活性、即飲食后的到達(dá)腸道的到達(dá)率是非常重要的因素。

為了解決這樣的問(wèn)題，通過(guò)改良制造方法、添加各種存活性改善劑，例如，N-乙酰葡糖胺、泛酸、肽類(lèi)、乳果糖等，進(jìn)行發(fā)酵飲食品水平的存活性改善。但是，這樣的雙歧桿菌屬細(xì)菌的存活性改善劑的添加，會(huì)導(dǎo)致制造成本增加，引起嗜好性的降低等問(wèn)題，因此不容易使用。此外，還研究了將剛制造后的含有雙歧桿菌屬細(xì)菌的發(fā)酵物填充以在不透氧性的包裝構(gòu)成的容器中，完全切斷與氧的接觸的方法。但是，不透氧性容器并不完美，缺乏成型的自由度，并且使用復(fù)合材料，廢棄物處理很復(fù)雜，容器本身價(jià)格也高，其利用有很多制約。

因此，改善發(fā)酵飲食品等中的雙歧桿菌屬細(xì)菌的存活性的根本解決方法，是制作即使在好氧的條件、低pH、高酸度的條件下也具有高的存活性的雙歧桿菌屬細(xì)菌，作為這樣的菌株的例子，可以列舉短雙歧桿菌YIT?10001（FERM?BP-8205）（專(zhuān)利文獻(xiàn)1）、短雙歧桿菌SBR3212（FERM?P-11915）（專(zhuān)利文獻(xiàn)2）、兩歧雙歧桿菌YIT?4002（FERM?BP-1038）（專(zhuān)利文獻(xiàn)3）等。

但是，這些存活性改善株存在只能夠期待在其制作方法中所使用的環(huán)境下的存活性改善效果的問(wèn)題。即，雙歧桿菌屬細(xì)菌變異株的制作中，通常使用在雙歧桿菌屬細(xì)菌繁殖困難的環(huán)境下進(jìn)行傳代培養(yǎng)保存、從而獲得生存株的方法，能夠期待在這些菌株的制作階段中所使用的環(huán)境下一定的存活性改善效果，但是在除此以外的環(huán)境下，無(wú)法期待存活性改善效果。因此，以現(xiàn)有方法所得到的雙歧桿菌屬細(xì)菌，不能適用于在與變異株制作條件不同的條件下流通的飲食品中，具有極低的通用性。

此外，雖然原因仍不清楚，但是已知在環(huán)境因素惡化的條件（例如，酸性區(qū)域pH）下進(jìn)行傳代培養(yǎng)保存而得到的存活性改善菌株，在更穩(wěn)定條件的中性區(qū)域pH下適用該菌株，也不能發(fā)揮存活性改善效果，這也是無(wú)法得到在各種飲食品中能夠適用的通用性高的菌株的一個(gè)原因。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)

專(zhuān)利文獻(xiàn)1：WO03/040350號(hào)國(guó)際公開(kāi)小冊(cè)子

專(zhuān)利文獻(xiàn)2：日本專(zhuān)利第2922013號(hào)

專(zhuān)利文獻(xiàn)3：日本特公昭61-19220

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明所要解決的問(wèn)題

因此，本發(fā)明的課題在于提供即使在環(huán)境因素不同的各種條件下存活性也優(yōu)異的雙歧桿菌屬細(xì)菌的制作方法、根據(jù)本制作方法得到的新型雙歧桿菌屬細(xì)菌和該細(xì)菌的檢測(cè)方法。

用于解決發(fā)明的方法

本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述課題，進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過(guò)在作為環(huán)境因素不同的條件的至少2種系統(tǒng)中交替進(jìn)行2次以上的傳代培養(yǎng)保存，能夠得到在交替?zhèn)鞔囵B(yǎng)保存中所使用的全部條件下的存活性?xún)?yōu)異的雙歧桿菌屬細(xì)菌。

并且，對(duì)于所得到的新型雙歧桿菌屬細(xì)菌的特異的檢測(cè)方法進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，能夠?qū)υ摷?xì)菌DNA片段進(jìn)行特異性擴(kuò)增的引物，使用該引物，能夠特異地檢測(cè)、定量該細(xì)菌。并且，發(fā)現(xiàn)組合這些引物和膜透過(guò)性色素，能夠定量該細(xì)菌的活菌數(shù)目。

即，本發(fā)明提供一種雙歧桿菌屬細(xì)菌的制作方法，其特征在于，在作為環(huán)境因素不同的條件的至少2種系統(tǒng)中交替進(jìn)行2次以上的傳代培養(yǎng)保存。

此外，本發(fā)明提供由上述制作方法得到的雙歧桿菌屬細(xì)菌。

此外，本發(fā)明提供飲食品，特別是發(fā)酵乳飲食品，其特征在于，含有上述雙歧桿菌屬細(xì)菌。

此外，本發(fā)明提供具有序列號(hào)1或序列號(hào)2所示的堿基序列或與該序列互補(bǔ)的堿基序列的DNA片段。

此外，本發(fā)明提供具有序列號(hào)1或序列號(hào)2所示的堿基序列或與該序列互補(bǔ)的堿基序列的短雙歧桿菌YIT?12272（FERM?BP-11320）用引物。