[發明專利]篩選核酸配體的方法

無效

• 申請號: 201180010296.X
• 申請日: 2011-02-23
• 公開（公告）號: CN102791883A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 畠山哲;伊比井崇向
• 申請（專利權）人: 佳能株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/09;G01N33/53
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.就與靶物質結合后形成特定二級結構的核酸配體篩選核酸配體候選體庫的方法，所述方法包括：

（a）制備核酸配體候選體庫，所述核酸配體包括用于結合靶物質的隨機序列結構域及用于形成特定二級結構的保守的序列結構域；

（b）在靶物質缺失下使庫與支持部接觸，其中與包括在核酸配體中的保守的序列結構域中的至少一個互補地結合的互補序列結構域布置在支持部的表面，然后通過利用在支持部的表面核酸配體和互補序列結構域之間形成分子間雙鏈體的現象分離及去除不形成分子間雙鏈體的核酸配體；以及

（c）通過在靶物質存在下使靶物質與（b）中獲得的余下形成分子間雙鏈體的核酸配體接觸來解離分子間雙鏈體，然后分離及收集具有通過與靶物質結合形成的特定二級結構的核酸配體，

其中方法包括至少一次（b）及至少一次（c）。

2.權利要求1的篩選方法，其中（c）包括：

收集（b）中獲得的余下形成分子間雙鏈體的核酸配體，使核酸配體與靶物質混合，并使混合物與支持部接觸，然后通過利用不形成分子間雙鏈體的現象分離及收集具有與靶物質結合后形成的特定二級結構的核酸配體。

3.權利要求1的篩選方法，還在（c）之后包括，（d）從收集的形成特定二級結構的核酸配體去除靶物質。

4.權利要求1的篩選方法，還在（b）之前包括：

使庫與靶物質接觸，從而對靶物質具有更高親和性的核酸配體形成核酸配體-靶物質復合物；

去除不形成復合物的核酸配體；

自復合物僅分離及收集具有更高親和性的核酸配體；以及

擴增具有更高親和性的核酸配體以產生富集的核酸配體候選體庫。

5.權利要求3的篩選方法，還在（d）之后包括：

使靶物質與形成特定二級結構的去除靶物質的核酸配體接觸，（c）中獲得的核酸配體，從而對靶物質具有更高親和性的核酸配體形成核酸配體-靶物質復合物；

去除不形成復合物的核酸配體；

自復合物僅分離及收集具有更高親和性的核酸配體；以及

擴增核酸配體以富集具有更高親和性的核酸配體。

6.就與靶物質結合后形成特定二級結構的核酸配體篩選核酸配體候選體庫的方法，所述方法包括：

（a'）制備核酸配體候選體庫，所述核酸配體包括用于結合靶物質的隨機序列結構域及用于形成特定二級結構的保守的序列結構域；

（b'）在靶物質存在下使庫與支持部接觸，其中與包括在核酸配體中的保守的序列結構域中的至少一個互補地結合的互補序列結構域布置在支持部的表面，然后通過利用在支持部的表面核酸配體和互補序列結構域之間形成分子間雙鏈體的現象分離及收集不形成分子間雙鏈體的核酸配體；

（c'）自（b’）中分離的及收集的核酸配體去除靶物質；以及

（d'）在靶物質缺失下使支持部與（c’）中獲得的去除靶物質的核酸配體接觸，然后分離及收集在支持部的表面核酸配體和互補序列結構域之間形成分子間雙鏈體的核酸配體。

7.鑒定形成特定二級結構的核酸配體的序列的方法，其中所述配體根據權利要求1獲得。