[發明專利]銅綠假單胞菌A血清型脂多糖的抗體

無效

• 申請號: 201180010247.6
• 申請日: 2011-02-18
• 公開（公告）號: CN102858975A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 田中二朗;P·S·安德森;奧富隆文;稻葉常良;大冢圭子;赤羽宏友;星名由佳利;長曾宏;熊谷正志
• 申請（專利權）人: 明治制果藥業株式會社;西福根有限公司
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;A61K39/395;A61P31/04;C07K16/12;C07K16/46;C12N5/10;G01N33/569;C12P21/08
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 寧濤;張廣育

技術領域

本發明涉及銅綠假單胞菌A血清型脂多糖的抗體及其應用。更具體地，本發明涉及特異性結合銅綠假單胞菌株A血清型脂多糖的抗體，以及含有任何該抗體的藥物組合物、銅綠假單胞菌感染診斷劑和銅綠假單胞菌檢測試劑盒。

背景技術

銅綠假單胞菌（Pseudomonas?aeruginosa）是廣泛且主要分布于自然環境如土壤和水中的革蘭氏陰性需氧桿菌。銅綠假單胞菌是通常不引起健康受試者致病的非病原細菌（avirulent?bacterium），所述健康受試者對銅綠假單胞菌具有中度的抗體效價以及足夠的免疫功能。然而，一旦體弱患者感染銅綠假單胞菌，銅綠假單胞菌可引起嚴重癥狀，其可導致所述患者死亡。為此，銅綠假單胞菌作為醫院感染和機會感染的主要病原菌引人矚目，因此預防和治療銅綠假單胞菌感染已經是醫學領域的重要問題。

為預防或治療銅綠假單胞菌感染，已經主要使用抗生素或合成抗菌劑。然而，銅綠假單胞菌產生了對這些藥物的抗藥性，因此這種藥物在許多情況下無法提供足夠的治療作用。特別地，使用抗生素等治療耐多藥銅綠假單胞菌（MDRP）的感染很難且有限制。為此，作為替代方法，已經開始進行使用免疫球蛋白制劑的治療。

同時，已經檢驗了使用銅綠假單胞菌的抗體預防和治療銅綠假單胞菌感染。例如，已經開發了各自與特定血清型銅綠假單胞菌株特異性結合的抗體（專利文獻1-5，以及非專利文獻1和2）。

然而，到目前為止開發的銅綠假單胞菌抗體在銅綠假單胞菌感染的預防或治療中尚無法提供足夠的作用。

引用列表

專利文獻

專利文獻1日本未審查專利申請公開號平6-178688

專利文獻2日本未審查專利申請公開號平6-178689

專利文獻3日本未審查專利申請公開號平7-327677

專利文獻4國際公開號WO2004/101622

專利文獻5國際公開號WO2006/084758

非專利文獻

非專利文獻1The?Journal?of?Infectious?Diseases,152,6,1985,1290-1299.

非專利文獻2Journal?of?General?Microbiology,133,1987,3581-3590.

發明內容

技術問題

鑒于上述情況作出本發明，且本發明的一個目標是提供對銅綠假單胞菌具有優異抗菌活性的新型抗體。本發明的一個主要目標是提供對銅綠假單胞菌具有優異抗菌活性且用作多克隆抗體制劑組分的新型抗體。作為這種新型抗體的一方面，本發明的一個目標是提供與銅綠假單胞菌株A血清型脂多糖特異性結合的抗體。

技術方案

為實現上述目標，本發明采用以下方法。首先，從慢性銅綠假單胞菌肺部感染的囊性纖維化患者和健康志愿者采集血液樣本。借助如下手段確定具有高比例的對脂多糖（下文中有時簡單稱為“LPS”）特異的成漿細胞的供體樣本：（1）測定血液循環中成漿細胞和漿細胞的量的FACS分析；（2）測定血液循環中細胞量的ELISPOT分析，所述細胞制造對具體LPS抗原特異的抗體；和（3）測定存在或不存在對具體LPS抗原特異的免疫血球蛋白的ELISA分析。下一步，由這樣確定的供體樣本制備識別LPS的抗體。

具體地，通過對CD19、CD38、λ-輕鏈和死細胞染色選擇存活成漿細胞。在選出的成漿細胞上，通過包括多重重疊延伸RT-PCR和后續巢式PCR的兩步PCR從相同B細胞獲得編碼重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL）的成對DNA序列（圖1）。下一步，將擴增的DNA插入篩選載體，并隨后轉化到大腸桿菌（Escherichia?coli）中。從所述大腸桿菌純化擴增載體的集合。將得到的抗體庫在動物培養細胞中表達。通過ELISA篩選編碼結合至純化的LPS分子的抗體的克隆，并選出LPS特異的克隆。隨后，測定所選出克隆的堿基序列。隨后，對由這樣得到的克隆所編碼的抗體檢測其各種活性、其血清型特異性和抗原表位。

作為結果，發現所確定的抗體與銅綠假單胞菌A血清型LPS結合，并在體外和體內具有優異抗菌活性。

具體地，本發明涉及與銅綠假單胞菌A血清型LPS結合的抗體，其表現出優異的抗菌活性。本發明也涉及該抗體的用途。更具體地，本發明提供