[發明專利]通過抑制RNA酶H1的天然反義轉錄物而治療RNA酶H1相關疾病

在審

• 申請號: 201180006257.2
• 申請日: 2011-01-25
• 公開（公告）號: CN102782135A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: J·克拉德;O·霍克瓦舍曼
• 申請（專利權）人: 庫爾納公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/7088;A61K48/00;C12N15/63
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務所 11313
• 代理人: 郝文博

發明領域

本申請要求2010年1月25日提交的美國臨時專利申請No.61/297878的優先權，其通過引用整體并入本文。

本發明的實施方案包括調節RNA酶H1和相關分子的表達和/或功能的寡核苷酸。

背景

DNA-RNA和RNA-RNA雜交對于核酸功能的許多方面是重要的，包括DNA復制、轉錄和翻譯。雜交對于檢測特定核酸或改變其表達的多種技術也是關鍵的。反義核苷酸，例如通過與靶RNA雜交從而干擾RNA剪接、轉錄、翻譯和復制來破壞基因表達。反義DNA具有額外的特性，即DNA-RNA雜交物作被核糖核酸酶H消化的底物，這是在大多數細胞類型中存在的活性。反義分子可被遞送到細胞中，如寡脫氧核苷酸(ODN)的情形，或反義分子可從內源基因表達為RNA分子。FDA最近批準了一種反義藥物VITRAVENE^TM(用于治療巨細胞病毒視網膜炎)，反映了反義藥物具有治療效用。

概述

提供本概述以展示本發明的概述，以簡要地指出本發明的性質和實質。提交本概述應理解的是，其不會用來解釋或限制權利要求書的范圍或含義。

在一個實施方案中，本發明提供通過利用靶向天然反義轉錄物任何區域的反義寡核苷酸而導致相應有義基因的上調來抑制天然反義轉錄物作用的方法。本文還預期，天然反義轉錄物的抑制可由siRNA、核酶和小分子實現，認為這些在本發明的范圍中。

一個實施方案提供體內或體外調節患者細胞或組織中RNA酶H1多核苷酸的功能和/或表達的方法，包括將所述細胞或組織與長度為5至30個核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與包括SEQ?ID?NO:2的核苷酸1至437或SEQ?ID?NO:3的核苷酸1至278或SEQ?ID?NO:4的核苷酸1至436或SEQ?ID?NO:5的核苷酸1至1140中的5至30個連續核苷酸的多核苷酸的反向互補序列具有至少50%序列同一性，從而體內或體外調節患者細胞或組織中RNA酶H1多核苷酸的功能和/或表達。

在實施方案中，寡核苷酸靶向RNA酶H1多核苷酸的天然反義序列，例如，SEQ?ID?NO:2至5所列的核苷酸及其任何變體、等位基因、同系物、突變體、衍生物、片段及其互補序列。反義寡核苷酸的實例如SEQ?ID?NO:6至13所列。

另一實施方案提供體內或體外調節患者細胞或組織中RNA酶H1多核苷酸的功能和/或表達的方法，包括將所述細胞或組織與長度為5至30個核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與RNA酶H1多核苷酸的反義的反向互補序列具有至少50%序列同一性；從而體內或體外調節患者細胞或組織中RNA酶H1多核苷酸的功能和/或表達。

另一實施方案提供體內或體外調節患者細胞或組織中RNA酶H1多核苷酸的功能和/或表達的方法，包括將所述細胞或組織與長度為5至30個核苷酸的反義寡核苷酸接觸，其中所述寡核苷酸與RNA酶H1反義多核苷酸的反義寡核苷酸具有至少50%序列同一性；從而體內或體外調節患者細胞或組織中RNA酶H1多核苷酸的功能和/或表達。

在實施方案中，組合物包括一種或多種結合有義和/或反義RNA酶H1多核苷酸的反義寡核苷酸。

在實施方案中，寡核苷酸包括一種或多種修飾或取代的核苷酸。

在實施方案中，寡核苷酸包括一種或多種修飾的鍵。

在又一實施方案中，修飾的核苷酸包括包含硫代磷酸酯、膦酸甲酯、肽核酸、2’-O-甲基、氟-或碳、亞甲基或其它鎖核酸(LNA)分子的修飾的堿基。優選地，修飾的核苷酸是鎖核酸分子，包括α-L-LNA。

在實施方案中，將寡核苷酸皮下、肌內、靜脈內或腹膜內施用給患者。

在實施方案中，寡核苷酸以藥物組合物施用。治療方案包括向患者施用反義化合物至少一次；然而，可修改該治療以包括經一段時間的多個劑量。該治療可與一種或多種其它類型的治療聯合。

在實施方案中，將寡核苷酸封裝在脂質體中或連接于載體分子(例如，膽固醇、TAT肽)。

其它方面在以下描述。

附圖簡述

圖1是實時PCR結果的圖，顯示利用Lipofectamine?2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸處理HepG2細胞后與對照相比RNA酶H1mRNA的倍數變化+標準差。標為CUR-0665、CUR-0666、CUR-0669、CUR-0670、CUR-0667、CUR-0668、CUR-0671和CUR-0672的條柱分別對應用SEQ?ID?NO:6至13處理的樣品。