[實用新型]老年性癡呆相關基因位點檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201120569477.3
• 申請日: 2011-12-31
• 公開（公告）號: CN202401070U
• 公開（公告）日: 2012-08-29
• 發明（設計）人: 任峻;張華忠
• 申請（專利權）人: 浙江愛易生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及分子生物學和醫學領域，具體涉及檢測老年性癡呆相關基因位點是否發生突變的試劑盒，通過同時檢測與老年性癡呆密切相關的載脂蛋白E（APOE）和脊髓灰質炎病毒受體相關2（PVRL2）的單核苷酸多態性位點基因型來評估個體患老年性癡呆癥的風險。

背景技術

阿爾茨海默病所謂的老年癡呆癥。是一種進行性發展的致死性神經退行性疾病，臨床表現為認知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進行性減退，并有各種神經精神癥狀和行為障礙。患病率研究顯示，美國在2000年的阿爾茨海默病例數為450萬例。年齡每增加5歲，阿爾茨海默病人的百分數將上升2倍，也就是說，60歲人群的患病率為1%，而85歲人群的患病率為30%。

載脂蛋白E（Apolipoprotein?E，APOE）是血漿脂蛋白的一個重要組成部分。APOE基因位于19號染色體。目前以有研究者們以聚合酶鏈式反應、限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）方法對APOE進行分型，以聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分析結果。由此從分子水平闡明APOE基因多態性與老年性癡呆（Alzheimer’s?disease，AD）的關系，尤其是ε4的多態性，對研究AD的發病機理、預防、診斷及早期防治有重大意義。

人類APOE存在基因多態性，其遺傳多態性主要受位于同一基因位點上的3個等位基因（ε2、ε3、ε4）所控制，分別編碼血漿中3種異構體，即APOE2、APOE3、APOE4，構成6種不同的基因型，3種純合子（ε2/ε2，ε3/ε3，ε4/ε4），3鐘雜合子（ε2/ε3，ε2/ε4，ε3/ε4）。APOE基因PCR-RFLP原理為用特異性引物擴增，包括2位點DNA序列，擴增產物進一步用HhalⅠ酶切，產生不同的限制性片段長度多態性ε2、ε3、ε4，由此產生6種不同的電泳圖譜。

APOE3是人群中最常見的形式。有學者報道APOE-ε4增加AD的危險性，APOE-ε2減少AD的危險性。APOE基因與晚發家族性AD，晚發散發型AD與早發散發性AD均有關聯。晚發性AD與APOEε4等位基因的聯系已被證實。AD患者攜帶ε4等位基因者占46.2%，而對照只占13.2%。

根據研究者的研究結果表明，AD患者的年齡分布和對照組之間無差別（u=0.97，P＞0.05）。等位基因在AD組與正常對照組之間有非常顯著的差異（P＜0.01）。其中ε2、ε3等位基因在AD組與對照組之間的比較無明顯差異（u=1.79，P＞0.05），ε4等位基因在對照組和研究者們的結果與國外報道一致。并且在AD組中，攜帶ε4基因型與對照組之間也有明顯差異（P＜0.01），而攜帶ε3等位基因，無明顯差異。ε4等位基因與對照組比較差異明顯（P＜0.05）。

1994年有報道百歲老人普遍攜帶APOE2等位基因。因此ε2等位基因似乎不僅可以保護人們免患AD，而且還與長壽有關。這一關系可能是由于ε2等位基因通過減少LDL—膽固醇濃度而達到保護機體的作用。

AD組與正常對照組中APOE基因型差異顯著。AD患者ε3的頻率與對照組相似。對照組ε2的頻率較高，但均無統計學差異。而患者ε4的頻率明顯高于對照，說明ε4對AD的發展及結果確實有一定的影響。這可能是AD患者特殊的腦損傷由APOE多態性所致。許多人傾向認為Aβ是首要的并且首先發生淀粉樣蛋白沉積。特別APOE4比APOE3結合Aβ的速度快，pH范圍狹窄。AOPE4還可以同Aβ結合形成新的單纖維，沉寂后形成高密度的結構。最近有學者認為，淀粉蛋白形成是AD的第一步，β淀粉蛋白斑的形成可能先于通常見到的導致AD腦細胞凋亡的“神經元纖維纏結”的產生。另一種與AD損傷有關的重復蛋白是微管蛋白Tau。APOE-Tau相互作用可能是防止Tau磷酸化的保護機制。對于攜帶一個或兩個ε4等位基因的患者，游離的Tau可能被磷酸化，從而影響了神經纖維的結構。

綜上所述，APOE特別是APOE4在多種神經退化過程的發展中起作用。研究者們研究AD患者的遺傳與APOE基因多態性的相關性，實驗結果闡明ε4與AD的發病有著一定的相關作用，而APOE3或APOE2與病理改變無明確的牽連。