[實用新型]人可溶性MICA蛋白酶聯免疫吸附測定試劑盒

有效

• 申請號: 201120512032.1
• 申請日: 2011-12-10
• 公開（公告）號: CN202471716U
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 龔拯;羅奇志;余平;林琳;劉立民
• 申請（專利權）人: 龔拯
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及生物技術領域，尤其涉及一種用于檢測可溶性MICA（sMICA）分子的試劑盒。?

背景技術

酶聯免疫吸附測定法（enzyme?linked?immunosorbent?assay,?ELlSA）是將抗原、抗體免疫反應的特異性和酶的高效催化作用原理有機的結合起來的一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗診斷方法，可敏感的檢測體液中的微量的特異性蛋白。?

MICA（MHC?class?I?related?chain?A）基因，是人類主要組織兼容復合體I類（MHC?I）相關的基因之一。MICA分子是表達在細胞膜表面的糖蛋白。與MHC-I類分子不同，MICA的表達僅局限于人體纖維細胞、內皮細胞和大多數的腫瘤細胞。在應急和感染的情況下，MICA分子的表達增高。在腫瘤細胞的轉移和器官移植的狀況下，MICA的表達也有增高的現象。NKG2D作為重要的激活性受體，可與MICA分子結合。從而激活NK細胞和CD8+T細胞的殺傷效果。NKG2D-MICA是機體先天免疫激活的重要活化通路。除了膜結合的MICA蛋白的分子形式外，MICA膜分子可能被酶切作用釋放進入外周血循環，形成游離的可溶性MICA（Solube?MICA,?sMICA）分子，在腫瘤患者血液中尤為明顯。近年來有研究檢測血清中sMICA濃度在肝病患者明顯增高，包括慢性肝病患者和肝細胞肝癌患者。而且他們還發現血清高濃度的sMICA能夠在體外實驗中下調NK細胞的NKG2D受體表達量。大量研究表明sMICA濃度的變化與許多疾病的發生發展相關，具有一定的診斷價值。?

發明內容

本實用新型要解決的技術問題是：提供一種檢測sMICA蛋白的ELlSA試劑盒，其操作簡便，成本低，穩定性好，適合于血液及其它生物液體中sMICA蛋白的檢測。?

為了解決上述技術問題，本實用新型所采用的技術方案是：一種人可溶性MICA蛋白酶聯免疫吸附測定試劑盒，包括酶標板，所述酶標板包括固相載體1和包被層3，固相載體1上設置有多個微孔2，包被層3附著在固相載體1的微孔2表面，包被層3是由抗人可溶性MICA蛋白單克隆抗體和牛血清白蛋白依次涂布在微孔2上形成的復合層。本實用新型采用ELlSA方法的試劑盒可以定量檢測血液或其它來源生物液體中可溶性MICA蛋白含量，顯著提高了可溶性MICA蛋白檢測結果的準確度；并且靈敏度高，特異性強，幾乎不受液體中其它物質，如酶抑制劑、激活劑等的影響，不受藥物的干擾，且操作簡單，省時省力，特別適用于可溶性MICA蛋白的檢測。?

附圖說明

圖1本實用型新一具體實施例酶標板結構示意圖。?

圖2本ELlSA試劑盒對標準sMICA*008不同稀釋濃度的檢測。?

圖3正常人群血清sMICA濃度分布。?

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例對本實用新型作進一步說明，以使得本領域的技術人員可以更好的理解本實用新型并能予以實施，但所舉實施例不作為對本實用新型的限定。?

如圖1所示，本實用新型試劑盒的酶標板，其包括固相載體1和包被層3，固相載體1采用96孔聚苯乙烯試劑板（PS）。固相載體1上有多個微孔2，包被層3附著在固相載體1上的微孔2上。包被層3是包括小鼠抗人可溶性MICA蛋白單克隆抗體和牛血清白蛋白的復合層。?

該具體實施例的試劑盒制備方法是：可采用96孔、48孔、60孔或12孔板?；?～12孔的聯排管，例如采用96孔聚苯乙烯試劑板（PS）作為固相載體，先將其置于紫外光下輻照2小時，是PS板活化。在試劑板微孔2上先包被一定濃度的捕獲抗體，該捕獲抗體是小鼠抗人可溶性MICA蛋白單克隆抗體，為IgGl亞型。4℃過夜，經洗板及牛血清白蛋白封閉處理后制成包被好的酶標板，以備標本檢測。?