[實用新型]魚類病毒性出血性敗血癥病毒快速檢測試紙

有效

• 申請號: 201120469335.X
• 申請日: 2011-11-10
• 公開（公告）號: CN202404102U
• 公開（公告）日: 2012-08-29
• 發明（設計）人: 王曉潔
• 申請（專利權）人: 魯東大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及養殖病害病原檢測技術的改進，具體講是一種魚類病毒性出血性敗血癥病毒(Viral?haemorhagic?septicaemia?virus，VHSV))快速檢測試紙，屬于檢測試紙結構技術領域。

背景技術

魚類病毒性出血性敗血癥(VHS)是由病毒性出血性敗血癥病毒(VHSV)引起的，屬彈狀病毒科RNA病毒。該病可侵襲野生的海水和淡水魚，導致大量的野生魚類的死亡。對養殖魚類的侵襲更為嚴重，近年來，全球VHSV檢出魚類種數持續攀升，達50余種魚類。VHS作為海水養殖魚類新興傳染性疾病，該病已對丹麥、瑞典、芬蘭的歐洲國家海水養殖虹鱒造成嚴重危害；對德國、英國、愛爾蘭的歐洲國家養殖大菱鲆造成嚴重危害；對加拿大海水養殖大西洋鮭造成一定損失；近年對日本養殖牙鲆，真鯛造成嚴重危害，而且北美基因型VHSV廣泛見于日本和韓國養殖牙鲆、日本養殖無備平鲉和太平洋玉筋魚，并廣泛見于日本沿岸野生牙鲆和太平洋玉筋魚；而分離自日本養殖牙鲆病魚的北美基因型和歐洲基因型VHSV，也對我國海水養殖魚類如許氏平鲉、赤點石斑魚、黑鯛等致病。因而，對于國內海水魚類養殖業，尤其是大菱鲆、牙鲆、真鯛、黑鯛、赤點石斑魚、許氏平鲉養殖業來說，防范魚類VHS發生，加強魚類VHS疫情監測，是非常重要的。

VHS是魚類口岸第一類檢疫對象，也是必需向世界動物衛生組織(OIE)申報的魚類疫病，鑒于VHS是淡水、海水養殖魚和野生魚中常發、高傳染性并且損失嚴重的疾病，現在全國只有少數出入境檢驗檢疫部門可做這方面的檢測，檢測方法復雜，限于實驗室內的檢測，需要儀器設備，檢測時間長，所用試劑均是國外進口，價格昂貴。因而，一種適用于在全國各地出入境檢驗檢疫部門均能方便的使用，在口岸現場快速、簡便、準確檢測VHSV的方法的研制勢在必行，及時的杜絕該病的傳入。

實用新型內容

本實用新型針對魚類病毒性出血性敗血癥危害現狀，針對水生生物生理特點，設計實用新型提供一種簡便、快速、準確的檢測方法，以達到快速、簡便、快速、準確的檢測目的的魚類病毒性出血性敗血癥病毒快速檢測試紙

本實用新型技術方案實現如下

魚類病毒性出血性敗血癥病毒快速檢測試紙，其包括：適當尺寸不干膠載體板(1)，在該載體板的中間部設有包被有魚類病毒性出血性敗血癥病毒單克隆抗體E的檢測線(6)和羊抗小鼠IgG的質控線(7)的硝酸纖維膜制成的檢測層(2)，與該層相延續的兩端設置吸水紙，分別構成加樣端吸水層(3)和手持端吸水層(4)；在檢測層(2)的檢測線(6)的遠端與加樣端吸水層(3)交界處，設有載有金標魚類病毒性出血性敗血癥病毒的單克隆抗體A的玻璃纖維膜(5)，該膜一端部分設置在加樣端吸水層(3)之下，其另一端部分設置在檢測層(2)之上。

本實用新型魚類病毒性出血性敗血癥病毒快速檢測試紙的檢測原理：將魚類病毒性出血性敗血癥病毒快速檢測試紙的加樣端吸水層插入或在其上滴加由磷酸鹽緩沖液從搗碎的魚腎臟提取含有病毒粒子的檢測樣品，根據夾心免疫層析原理，即由金標單抗A同檢測樣品液中的抗原反應，形成由金標單抗A-魚類病毒性出血性敗血癥病毒復合物，當該復合物層析至硝酸纖維素膜上預先包被在檢測線上的單抗E處時，此處的抗體會識別該復合物中抗原，反應的結果便形成了金標單抗A+魚類病毒性出血性敗血癥病毒抗原+單抗E的夾心結構，最終是單抗A上標記的膠體金顆粒在此固定并累積出現肉眼可見的紅色線，未反應的金標單抗A則仍繼續層析前行，當到達點預先包被在質控線羊抗鼠IgG處時，抗體類型為IgG的金標單抗A被其結合住，從而在此處也出現由膠體金顆粒固定并累積而顯現出肉眼可見的紅色線，結果是：檢測線顯示紅色表示魚類病毒性出血性敗血癥病毒陽性；檢測線不顯示紅色，表示魚類病毒性出血性敗血癥病毒陰性，即檢測樣品中不含魚類病毒性出血性敗血癥病毒或是魚類病毒性出血性敗血癥病毒含量極低。質控線顯示紅色，表示試紙有效；質控線處不顯示紅色，說明試紙失效，即或是金標抗體A、或是羊抗鼠IgG失活，檢測結果無效。

本使用新型具有以下優點：

1、本實用新型的魚類病毒性出血性敗血癥病毒快速檢測試紙，使用時無需專門設施和操作技術，適合樣品的現場檢測，具有檢測快速、準確、靈敏、特異性高等特點，并具有較高的穩定性及重復性；

2、本實用新型的魚類病毒性出血性敗血癥病毒快速檢測試紙使用方法中，無需加入特殊的裂解液；只需將魚腎臟搗碎即可，與傳統病毒提取研磨、離心等方法相比，此方法方便簡單，可快速提取病毒檢測。

附圖說明

本實用新型的實施例結合附圖進一步描述如下：