[實用新型]一種用于PCR反應的試劑盒

有效

• 申請號: 201120360173.6
• 申請日: 2011-09-23
• 公開（公告）號: CN202246700U
• 公開（公告）日: 2012-05-30
• 發明（設計）人: 徐夢曄
• 申請（專利權）人: 上海熙洛生物技術有限公司
• 主分類號: C12M1/38
• 分類號: C12M1/38
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 傅靖

技術領域

本實用新型涉及生物實驗技術領域，特別是涉及PCR實驗領域一種用于PCR反應的試劑盒。

背景技術

PCR（polymerase?chain?reaction，聚合酶鏈式反應）因其靈敏度高，特異性強，已作為一種成熟技術成為分子生物學研究的關鍵技術，廣泛應用于生物科學的各領域實驗中。其基本原理是依據體內細胞分裂中的DNA半保留機制，通過制造一個體外合成系統的溫度，促使雙鏈DNA解開為單鏈，再由單鏈DNA與人工設計的引物復性，由DNA聚合酶根據引物的位置沿單鏈模板復制為雙鏈DNA。整個PCR過程由高溫變性、低溫復性和一定溫度下延伸三個步驟循環構成。所以在PCR實驗中，對溫度的控制非常重要。

在常規的PCR實驗中，通常是將DNA樣本、引物等試劑根據要求放置于普通384孔或96孔塑料基板內，在基板的表層附上一層透明的塑料膜，以封閉溶液體系。在PCR實驗平臺的往復溫度變化后，通過普通光源或激光透過塑料膜進行分析。

在PCR實驗中一般要求DNA樣本溫度隨著PCR的溫度同時變化，PCR反應中，從高溫到低溫或從低溫到高溫的溫度變化靈敏性越高越好。在普通塑料基板上，由于塑料本身在溫度傳遞上有一定的延遲，而且也會吸收一定的熱能，導致溶液體系的溫度與理想溫度有一定誤差。另外在通過光源分析時，由于基板的變形及塑料膜本身透光率的問題，導致反應結果出現一定的系統誤差。并且當實驗的樣本量不是很大的情況下，在普通的384孔或96孔板的基板上，一旦附上塑料膜，對區別已加樣的孔和沒加樣的孔需要仔細辨認，加大了實驗者的工作量和工作強度。?

實用新型內容

本實用新型的目的是提供一種應用于PCR實驗的試劑盒，具有結構簡單，溫度適應性強，透光率好，成本低廉等特點。

為達到上述目的，本實用新型的技術方案是：一種用于PCR反應的試劑盒，包括基板和設于所述基板上面的表面覆膜，所述表面覆膜上設有穴坑。

優選的，所述穴坑設有凸沿。

優選的，所述凸沿與所述表面覆膜是一體成型的。

優選的，所述穴坑內設有反應體系和用于封閉所述反應體系的封閉層。

優選的，所述基板采用親水性、耐腐蝕、高溫下不易變形的透明材料。

優選的，所述基板采用硼硅酸鹽超薄玻璃材料。

優選的，所述表面覆膜采用耐高溫、變形率小的材料。

優選的，所述表面覆膜采用有機硅塑料為材料。

優選的，所述表面覆膜與所述基板接觸的一面設有熱熔粘合劑。

優選的，所述穴坑的數量及形狀與采用的PCR儀器的反應孔匹配。

優選的，所述封閉層為石蠟。

基板采用親水性、耐腐蝕、高溫下不易變形的透明材料，優選為硼硅酸鹽玻璃所制，該基板由于其材質及超薄的特性不會隨著溫度的變化而出現變形，并且耐腐蝕，親水性好。

表面覆膜的材質為采用耐高溫、變形率小的材料，優選有機硅塑料，表面覆膜的反面涂有熱熔粘合劑，將覆膜放置與基板上，在加熱模塊加熱片刻，輕微壓制便可粘貼在一起。

表面覆膜的穴坑有凸沿，凸沿與表面覆膜是一體成型的。

由于本試劑盒的結構簡單，可以在PCR儀器中保持溶液體系溫度和儀器溫度一致性。試劑盒本身不易變形，不會吸收能量導致溶液溫度不夠。

對于單個細胞的PCR實驗，在本試劑盒中，能夠將單個細胞很好地束縛在一個封閉的體系內，避免單個細胞的布朗運動，且細胞溶解物的濃度有所提高，便于數據的探查。

還可用封閉層來封住反應體系，封閉層采用低熔點的多脂石蠟溶液，在加樣完畢后，將石蠟溶液加熱至57℃-60℃，呈溶液狀后，加到每個加樣孔上，以封閉反應體系。過去的試劑盒是使用塑料膜，厚度大約為10-20μm，且塑料膜與反應體系之間有間隙存在，增加了光透率。本試劑盒的封閉層采用液體石蠟，每個加樣孔加入1-5ul石蠟，厚度約為5-10μm。且石蠟溶液表面張力較強，會在反應體系上面形成隔離層，完全貼合地封閉反應體系，不會像傳統384孔板等試劑盒那樣在光學膜和反應液體間形成空腔，加之厚度也比塑料膜薄，因此光透性較固態的塑料膜好。

本技術方案的有益效果是：本裝置結構簡單，使用方便，對于小樣本量的實驗，本裝置更易于分辨加樣孔和無加樣孔，并且成本低廉，制備快速。?

附圖說明

圖1是試劑盒單個穴坑工作時示意圖；

圖2是試劑盒384孔布置圖。

圖中：