[實用新型]四種腹瀉病病原菌納米可視化基因芯片

有效

• 申請號: 201120349851.9
• 申請日: 2011-09-16
• 公開（公告）號: CN202482330U
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 張曉龍;張玲;慈穎;馬愛敏;房健慧;馬曉光
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C40B40/06;C12R1/63;C12R1/19;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型提供了一四種腹瀉病病原菌的納米可視化基因芯片，使具有良好的特異性及重復性，在裸眼觀察條件下，檢測限可達100fM。?

背景技術

DNA芯片的基本原理是在固相支持物上固定核酸并通過雜交過程來檢測樣品。此基本原理實際來自于20世紀70年代出現的Southern?blot和Northern?blot技術。80年代中期，國際上幾個研究小組同時開發了雜交測序的技術。基本原理是在固相支持物上固定成百上千個8堿基長度的寡核苷酸片段，然后與待測序的DNA片段進行雜交。由于不同的寡核苷酸的堿基序列是相互覆蓋的，通過計算機來分析雜交信號，便可以拼接出未知DNA的序列。Fodor等人1991年2月在Science雜志上發表論文，他們利用固相化學合成，光敏保護基團及光刻掩膜技術，在固相支持底物上高密度合成了多肽和寡核苷酸，并用合成的多肽在固相支持物上與抗體進行了親和反應。隨后，1991年9月Science雜志發表了一篇評論，介紹了Fodor等人在1.28cm2的面積上原位光合成65,000個點的工作，第一次提出了DNA芯片(DNA?chip)的概念。到1995年，Schena等人在Science雜志上發表論文，將45個擬南芥基因固定在一張玻?片上，并行檢測擬南芥植株不同組織及不同處理后45個基因表達的變化。此報導第一次將高精度機械手點樣技術，熒光標記技術，雙信道熒光掃描技術及數據分析軟件結合在一起，可以說是DNA芯片技術在基因表達分析中第一次真正意義上的應用。隨后，用于基因表達分析的DNA芯片技術發展迅速，在玻片上點樣的密度越來越大。部分已經完成基因組測序的微生物的全基因組DNA芯片已經制備出來并應用于各項研究中：如釀酒酵母、結合桿菌、大腸桿菌以及白色念珠菌的全基因組DNA芯片。隨著人類基因組計劃的完成和功能基因組學研究的進展，制作出人類全基因組DNA芯片將只是一個時間上的問題。?

現在用生物芯片技術分析的物種包括人、酵母、小鼠、大鼠、黑猩猩、大猩猩、果蠅、線蟲、玉米、水稻、棉花、細菌和病毒等。目前有超過3000篇的論文與芯片分析有關。這些論文從不同的角度表明了微數組技術的多樣性、不同研究單位的研究側重點以及此技術領域商業化產品的多樣性。?

實用新型內容

本實用新型的主要目的在于提供一種四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片。?

本實用新型的技術內容為：四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片，其是由聚苯乙烯材料制成之三孔芯片，并形成數組模式，芯片上取霍亂弧菌、痢疾桿菌、出血性大腸桿菌O157、空腸彎曲菌之DNA?為探針。?

微孔板芯片每孔芯片的探針排列皆為4×4的矩陣。?

下面結合附圖和具體實施例對本實用新型作進一步描述。?

附圖說明

圖1為本實用新型的實施例圖。?

【主要組件符號說明】?

1……芯片????2……微孔?

具體實施方式

為了更充分理解本實用新型的技術內容，下面結合具體實施例對本實用新型的技術方案進一步介紹和說明。?

本實用新型四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片，系由聚苯乙烯材料制成之三孔芯片，并形成數組模式，芯片上取霍亂弧菌、痢疾桿菌、出血性大腸桿菌O157、空腸彎曲菌之DNA為探針。而微孔板芯片每孔芯片的探針排列皆為4×4的矩陣，?

本實用新型四種腹瀉病病源菌納米可視化基因芯片，基因芯片技術平臺一般包括5個部分：芯片的基質材料、把DNA固著到芯片上的裝置、核酸雜交控制系統、讀取雜交信號的光學掃描系統以及讀取和分析數據的計算機軟件工具，由于不同的文獻對探針(probe)和靶標(target)有不同的定義，這里我們的定義是固定在基質載體?上的DNA被稱為探針，而來自生物樣品的核酸被稱為靶標。?

參考目前已發表的相關文獻，我們從NCBI上下載所需微生物的GenBank文件，利用軟件primer?premier5在保守序列上設計相關病毒的特異性引物及探針。在引物的設計過程中，盡可能使不同引物對之間的退火溫度趨于一致(4對引物退火溫度均在49-54℃之間)，以利于后期的多重PCR過程。設計的引物和探針序列見表1.?