[實用新型]一種定性/定量檢測乙型肝炎病毒表面抗原的磁珠免疫層析試劑盒

有效

• 申請號: 201120191610.6
• 申請日: 2011-06-09
• 公開（公告）號: CN202141725U
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 顏真;王偉華;孫建斌;雷小英;郭晏海;包晗;海春旭
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本實用新型屬于免疫層析檢測技術領域，特別涉及一種定性/定量檢測乙型肝炎病毒表面抗原的磁珠免疫層析試劑盒。

背景技術

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一種世界性疾病。發展中國家發病率高，據統計，全世界無癥狀乙肝病毒攜帶者(HBsAg攜帶者)超過2.8億，我國約占1.3億。多數無癥狀，其中1/3出現肝損害的臨床表現。目前我國有乙肝患者3000萬。近年來病毒性肝炎、肝纖維化、脂肪肝、酒精肝、藥物性肝損害及肝硬化、肝癌等肝病是當今社會威脅人類健康的主要疾病之一。

乙型肝炎病毒(HBV)是一種DNA病毒，屬嗜肝DNA病毒科(hepadnavividae)，是直徑42nm的球形顆粒。又名Dane顆粒，有外殼和核心兩部分。外殼厚7-8nm，有表面抗原(HBsAg)，核心直徑27nm，含有部分雙鏈，部分單鏈的環狀DNA，DNA聚合酶，核心抗原及e抗原。HBVDNA的基因組約含3200個鹼基對。長鏈的長度固定，有一缺口(nick)此處為DAN聚合酶；短鏈的長度不定。當HVB復制時，內源性DNA聚合酶修補短鏈，使之成為完整的雙鏈結構，然后進行轉錄。HBV?DNA的長鏈有4個開放性讀框(ORF)，即S區、C區、P區和X區。S區包括前S1前S2和S區基因，編碼前S1、前S2和S三種外殼蛋白；C區以包括前C區，C區基因編碼HBcAg蛋白，前C區編碼一個信號肽，在組裝和分泌病毒顆粒以及在HBeAg的分泌中起重要作用；P基因編碼DNA聚合酶；X基因的產物是X蛋白，其功能尚不清楚。HBVDNA的短鏈不含開放讀框，因此不能編碼蛋白。

HBsAg是乙肝病毒外殼部分的蛋白質，乙肝病毒感染人體后，便在肝細胞內復制裝配，其中外殼部分常有剩余，此剩余物進入血液就形成HBsAg血癥。由于HBsAg本身不是完整的乙肝病毒，不含核酸，也無DNA聚合酶活力，故無傳染性，但有抗原性。由于它常伴隨乙肝病毒的存在，故已被定為現癥HBV感染的指標之一，檢測HBsAg有助于乙型肝炎的診斷。

在急性乙型肝炎，HBsAg常在感染乙肝病毒后6-12周出現，當氨基轉移酶(ALT、AST)或膽紅素開始上升時，HBsAg滴度達到高峰；當癥狀出現后HBsAg滴度開始下降，多在發病4～5個月內消失。由于HBsAg是感染乙肝病毒后出現的第一個乙肝病毒標志物，故常用于急性乙型肝炎的早期診斷。在乙型肝炎急性癥狀消失、肝功能恢復后，而HBsAg仍持續陽性者，常提示肝炎慢性化。另外需要指出的是：有相當一部分HBSAg陽性的肝炎病人，其原先可能就有乙肝病毒感染，常表現為無癥狀帶毒者，病情在不知不覺中進展，一旦出現癥狀，已是慢性乙型肝炎，甚至已是肝硬化了。

自從二十世紀八十年代，側向免疫層析技術發展之初，這項技術就被廣泛的接受。主要是因為其實驗設計的簡便性：側向免疫層析產品具有小而便于攜帶的優勢，而且大多數產品不需要額外的試劑去實現結果，還有液態樣品直接可以用于測試，測試結果也能快速簡便的讀取，而且經常不需要任何儀器的輔助。其強大的功能在于可以將多個樣品同時在同一個產品上測量。其容易和其他技術結合起來綜合分析，如警察可以再路邊上用一個小型儀器同時測量藥物和酒精超標情況。免疫層析試紙條的制作相對容易且成本低、材料成分的改進，加工儀器的改進，更加注意生產質量等都可以增加可信度，精確性。

然而，不斷涌現的對定量的結果和敏感性的要求對這項技術的提出了更大的挑戰。磁性納米顆粒的出現使得這一技術得到了快速的發展，借助小型儀器對試紙條上免疫磁珠微量磁信號的檢測從而對樣品實行定量檢測，大大提高了檢測的靈敏度，使得這一技術得到認可。

納米磁珠免疫層析檢測試劑盒檢測的基本原理如下：利用納米磁珠標記一種抗原或抗體，成為免疫磁珠，在NC膜上包被相應的配對的抗原或抗體，檢測時當樣品中含有相應的抗體或抗原時，免疫磁珠會和樣品中的抗原或抗體結合形成復合物，然后在NC膜上層析，再被捕獲線上的抗體或抗原捕獲，聚集在檢測線上，數分鐘后，再通過MICT磁信號檢測儀測定檢測線上捕獲磁珠的含量實現結果的判定。磁珠免疫層析試紙條的最大特點是可以通過MICT磁信號檢測儀讀取磁珠含量，定量檢測樣本中分析物的含量，而不只是像傳統的膠體金一樣只能通過肉眼觀察或評價其顏色深淺，因此使得結果更精確靈敏，數據客觀，易于讀取、保存記錄。

實用新型內容

本實用新型解決的技術問題在于提供一種定性/定量檢測乙型肝炎病毒表面抗原的磁珠免疫層析試劑盒，將超順磁性納米顆粒作為標記物，具有簡便快速、定量、實時檢測的優勢。

本實用新型是通過以下技術方案來實現：