[實用新型]巨細胞病毒IgM和IgG抗體聯合檢測試紙

有效

• 申請號: 201120186072.1
• 申請日: 2011-06-03
• 公開（公告）號: CN202182882U
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 霍五奎;岳曉燕;馬雪明;劉寅;王晶;羅云萍;張有青
• 申請（專利權）人: 正元盛邦(天津)生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型是涉及生物應用技術領域，特別是涉及一種以膠體金免疫層析法快速檢測巨細胞病毒IgM和IgG抗體聯合檢測試紙?

背景技術

巨細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)屬于皰疹病毒亞科，是人皰疹病毒科中最大、結構也最復雜的病毒。巨細胞病毒感染在人群中較廣泛，大多數呈臨床非顯性感染或潛伏感染，在絕大數免疫正常個體，呈現無癥狀感染；但在免疫缺陷個體、胎兒和嬰幼兒個體可出現明顯病癥，顯性感染則有多樣化的臨床表現，嚴重者可致死。HCMV是引起新生兒先天性感染的重要病原體微生物之一。在孕婦，原發或新的HCMV復發感染均可引起新生兒宮內感染或圍生期感染，可導致死胎、流產、早產，及先天畸形，智力發育障礙，嚴重可引起巨細胞包涵體病，故該病的防治工作影響到優生優育和人口質量。?

目前對巨細胞病毒檢測的主要方法是巨細胞病毒特異性抗體檢測。檢測巨細胞病毒IgM判定是否為現癥感染，檢測IgG判定是否曾經感染過。檢測兩種抗體有利于對被檢對象的進行全面的判定，指導優生優育。目前巨細胞病毒抗體的檢測方法主要是ELISA等檢測方法。在膠體金的檢測方法中，有單獨檢測巨細胞病毒IgM或IgG的報道，但用膠體金類免疫層析技術同時檢測巨細胞病毒IgM和IgG抗體的檢測試紙尚未有相關報道。和用兩種試劑分別檢測IgM和IgG抗體相比，同時檢測IgM和IgG抗體能減少檢測人員的工作量，節約成本；同時減少采血量，減少患者的痛苦。?

免疫層析膠體金技術是新型的診斷技術，在抗體檢測方面已得到較為廣泛運用，基本原理如下：利用膠體金標記一種抗原或抗體，在試劑的NC膜上包被相應的配對抗原或抗體，檢測時當樣品中含相應的特異性抗體或抗原時，膠體金標記顆粒和樣品中配體相結合形成復合物，然后在NC膜上層析，再被包被抗原或抗體捕獲，形成肉眼可見的檢測T線，通過檢測線的有無實現對結果的判定。具有操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性?強、適合現場檢測和經濟實用等優點。?

發明內容

本實用新型的目的是提供一種巨細胞病毒IgM和IgG抗體檢測試紙，具有操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、適合現場檢測和經濟實用等優點。?

本實用新型提供一種巨細胞病毒IgM和IgG抗體聯合檢測試紙，其特征在于塑料支撐板(8)一端粘貼上樣墊(1)，上樣墊(1)的一端緊密壓接含有標記巨細胞病毒特異性的抗原p150或p52或gB的膠體金墊(2)，膠體金墊(2)一端緊密壓接硝酸纖維素NC膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測線T1(5)、檢測線T2(6)和質控C線，檢測線T1(5)為抗人IgM抗體，檢測線T2(6)為抗人IgG抗體，質控C線(7)為抗巨細胞病毒P150或p52或gB抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4)形成試紙。?

所述的巨細胞病毒IgM和IgG抗體聯合檢測試紙，其特征在于所述的抗原為巨細胞病毒特異性的主要抗原p150或p52或gB抗原，抗原可以利用基因工程重組表達或在培養病毒中純化。?

所述的巨細胞病毒IgM和IgG抗體聯合檢測試紙，其特征在于所述的上樣墊(1)為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊(4)由吸水濾紙構成。?

所述的巨細胞病毒IgM和IgG抗體聯合檢測試紙，所述的抗原的包被方法為：以0.01M?pH?7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗人IgM抗體配制成1-2mg/ml的溶液，以0.01M?pH?7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗人IgG抗體配制成1-2mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1-1.5ul/cm的參數進行劃線，包被T1、T2線，同時在NC膜上部包被抗巨細胞病毒P150抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25℃，濕度小于30％，干燥2-5小時。?

所述的巨細胞病毒IgM和IgG抗體聯合檢測試紙，所述的抗原標記膠體金顆粒的方法為：以氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為30-50nm的膠體金溶液，制備完成后取100ml膠體金液放在燒杯內，用0.2M?K₂CO₃調至pH8.0，按100ml膠體金溶液加入0.5-2mg巨細胞病毒p150、p52、gB?抗原，室溫攪拌2小時，加入1％牛血清白蛋白BSA，1％聚乙二醇PEG20000封閉20min，12000r/m離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復溶至100ml，按1ml溶液鋪20cm²的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜或無紡布上，再置干燥間，溫度20-25℃，濕度小于30％，干燥2-5小時，制成膠體金墊。?