[實用新型]膠體金層析法抗Cenp-B抗體檢測試紙

有效

• 申請號: 201120031146.4
• 申請日: 2011-01-28
• 公開（公告）號: CN202083694U
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 韓永俊;高成秀;張玥;葛文斌;孫宏彬;錢杰
• 申請（專利權）人: 上海科新生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

技術領域

本實用新型屬于醫學免疫應用領域，具體涉及到利用膠體金免疫層析技術檢測抗Cenp-B抗體的試紙。?

背景技術

1980年Moroi等首次發現抗著絲點抗體(Anti-Centromere?Antibody，ACA)。早期研究顯示ACA常見于局限于皮膚病變的系統性硬化癥(CREST綜合癥)患者血清中。采用蛋白質印跡法檢測染色質提取物，發現其主要靶抗原為CENP-A、CENP-B、CENP-C。但CENP-B為主要的抗原表位。因此本實用新型選擇了Cenp-B的優勢表位克隆化表達為檢測抗原。(Earnshaw?W，Bordwell?B，Marino?C，et?al.Their?human?chromosomal?auto?antigens?are?recognized?by?sera?from?patients??with?anticentromere?antiboedies.J?Clin?Invest，1986；77：426-430)。?

抗Cenp-B抗體可用Hep-2細胞系快速法和間接免疫熒光法檢測到。其抗原位于著絲點內外層，但不包括DNA。其三個主要抗原為CENP-A蛋白(19KD)，CENP-B蛋白(80KD)和CENP-C蛋白(140KD)。其中CENP-B抗原在診斷中起主要的作用。因為它是所有ACA(著絲點)抗體共有的靶抗原。?

抗Cenp-B抗體主要出現于一定形式的進行性系統性硬化癥(PSS)中，尤其是CREST綜合癥(皮內鈣質沉著，Raynaud現象，食管運動功能混亂，指端硬化，遠距離血管擴張)，其檢出率為50-70％。ACAs對PSS的預后較佳，出現此抗體時，在CREST綜合癥病人中極少觀測到心肺腎的病變(Earnshaw?W，Bordwell?B，Marino?C，et?al.Their?human?chromosomal?auto??antigens??are??recognized??by??sera??from?patients??with?anticentromere?antiboedies.J?Clin?Invest，1986；77：426-430)。?

抗Cenp-B抗體可在25％的表現出Raynaud現象的患者中檢測到。由于它與膠原病的發生有關，抗Cenp-B抗體的測定對此病的預測極為重要。?(Whyte?J，Soriano?E，Earnshaw?WC，et?al.Frequency?of?autoantibodies??to??a??major??epitope??on?the??carboxyl??terminal?fragement?of?CENP-B?in?patients?with?autoimmune?disease，Brit?J?Rheumatol，1995；34：407-412.)。?

抗Cenp-B抗體也可見于原發性膽汁性肝硬化(10％-20％)。但在單獨的肺動脈高壓癥，SLE和原發性干燥綜合癥患者中，此抗體極少出現(Mahler?M，Mierau?R，Bluthner?M.Fine-specificity?of?the?anti-CENP-A?B-cell?autoimmune?response.J?Mol?Med，2000；78(8)：460-467.)。?

目前實驗室常用的檢測抗Cenp-B抗體的方法主要有酶聯免疫吸附劑試驗(enzyme?linked?immunosorbent?assay，ELISA)、間接免疫熒光法(indirect?immunoflurescence，IFF)、免疫印跡法(immunoblotting?test，IBT)、線性免疫分析法(Line?immuno?assay，LIA)等。?

免疫印跡法雖綜合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特異性和敏感性，但操作相對復雜，完成整個實驗過程需三小時左右，亦需要專業免疫學技術人員在實驗室中進行實驗操作，同時易受各種溫度和孵育時間等環境條件因素的影響，對試驗帶來諸多不便。且試劑具有較強的毒性和污染性。目前市場上商品化抗Cenp-B抗體抗體檢測試劑盒主要為免疫印跡法。?

間接免疫熒光法可作半定量測定，但需要專業人員操作特殊的熒光顯微鏡觀察結果，結果判定有一定的主觀人為判斷誤差，客觀性不足；另外易受其他干擾產生假陽性，標準化困難，技術程序比較復雜，檢測時間長，也不適合高通量標本的檢測。?

線性免疫分析法主要用于疾病大類的篩查，針對性相對較差，同時也不適合高通量樣本的檢測。?