[發(fā)明專利]人成纖維細胞生長因子21融合蛋白及其突變體的制備與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110463001.6
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102558358A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設計）人: 張海濤
• 申請（專利權）人: 張海濤
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/16;C12N15/81;C12N15/70;C12N15/85;A61K38/18;A61K47/48;A61K48/00;A61P3/04;A61P3/10
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1.一種融合蛋白，由人成纖維細胞生長因子21(FGF21)及突變體通過連接肽(Linker)與IgG-Fc或IgG-Fc突變體形成，其通式為FGF21-Linker-IgG-Fc或者IgG-Fc-Linker-FGF21。

2.權利要求1所述FGF21為人成纖維細胞生長因子21(SEQ?ID?NO：1)或其突變體，根據(jù)本發(fā)明的一方面，所述FGF21突變體選自如下任意一個突變或者多突變的任意組合，其中突變位點選自：

(a)45位丙氨酸突變?yōu)榫彼幔劝彼幔劝滨０罚嚢彼峄蛱K氨酸；

(b)98位亮氨酸突變?yōu)榫彼幔劝彼幔劝滨０罚嚢彼峄蛱K氨酸；

(c)111位丙氨酸突變?yōu)樘K氨酸或賴氨酸；

(d)129位丙氨酸突變?yōu)榫彼幔於０罚於彼幔劝彼幔?/p>

(e)170位甘氨酸突變?yōu)楸彼幔於０罚腚装彼峄蚋彼幔换?/p>

(f)171位脯氨酸突變?yōu)楣劝彼幔M氨酸，谷氨酰胺，蘇氨酸或酪氨酸。

3.權利要求1所述Linker選自序列SEQ?ID?NO：2，SEQ?ID?NO：3，SEQ?ID?NO：4，SEQ?ID?NO：5，SEQ?ID?NO：6或SEQ?ID?NO：7，也可以選自(GGGGS)n，其中n可以是1，2，3，4，5或6。

4.權利要求1所述Linker可以選自SEQ?ID?NO：8，其中n可以是1，2，3，4，5或6，另外，也可以直接連接，或者為其它甘氨酸富集的連接肽。

5.權利要求1所述IgG-Fc(鉸鏈區(qū)-CH2-CH3)序列為人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc及其突變或缺失體，上述序列選自SEQ?ID?NO：9，SEQ?ID?NO：10，SEQ?ID?NO：11或SEQ?ID?NO：12，或者選自上述IgG-Fc序列的雜合體，其中IgG-Fc序列參照EU(Kabat)指數(shù)進行編號，重要的是上述IgG-Fc突變體選自序列SEQ?ID?NO：13，SEQ?ID?NO：14，SEQ?ID?NO：15，SEQ?ID?NO：16，上述突變位點可以是單個位點突變或是選自如下多位點突變組合，其中：

Xaa₁＝Gln或Thr

Xaa₂＝Gln或Thr

Xaa₃＝Leu，Met或His

Xaa₄＝Ala或Asn。

6.根據(jù)權利要求1所述，更進一步，與FGF21相連的融合蛋白可以選自人血白蛋白或轉鐵蛋白，也可以選自人血白蛋白或轉鐵蛋白部分片段、突變體和缺失體。

7.權利要求1～5所述融合蛋白應用于人I型和II型糖尿病及肥胖癥的預防與治療，或者其DNA序列應用于基因治療。

8.權利要求5所述融合蛋白突變體，是基于增加與FcRn的親和力來進一步增加FGF21在體內的半衰期。

9.權利要求1～5所述融合蛋白使用酵母，CHO，SP2/0，BHK和/或HEK293細胞進行表達，?蛋白純化過程中使用A或G蛋白葡聚糖凝膠層析柱。

10.權利要求1～5所述融合蛋白使用大腸桿菌進行表達。?