[發(fā)明專利]DNA疫苗

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110461902.1
• 申請(qǐng)日: 2011-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103182090A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬全紅;肖志成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 馬全紅;肖志成
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K39/00;A61P25/28;A61P9/10;A61P35/00;C12N15/85
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 劉辛;郭文潔

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明一方面涉及生物醫(yī)藥研究領(lǐng)域，尤其是涉及髓鞘相關(guān)蛋白在阿爾茨海默病中的病理作用及作為藥物靶點(diǎn)的價(jià)值研究；另一方面涉及生物工程疫苗領(lǐng)域，尤其是涉及髓鞘相關(guān)蛋白在制備針對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生物工程DNA疫苗中的應(yīng)用及包含編碼所述髓鞘相關(guān)蛋白的DNA片段的疫苗和疫苗制備方法。

背景技術(shù)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s?Disease，AD)是以β淀粉樣沉淀(β-Amyloid，Aβ)和tau過(guò)度磷酸化形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)(Neurofibullar?tangels)為主要病理標(biāo)志的神經(jīng)退行性疾病。Aβ和tau過(guò)度磷酸化都會(huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性損害。然而，目前針對(duì)Aβ和tau的藥物在臨床試驗(yàn)中的效果并不理想。因此，利用一些有神經(jīng)保護(hù)、促進(jìn)變性神經(jīng)再生以及促進(jìn)神經(jīng)可塑性重建的治療手段有可能是目前治療AD更有效的措施。

髓鞘及其相關(guān)蛋白在神經(jīng)再生中起著重要的作用。受損傷后，中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central?Nervous?System，CNS)神經(jīng)軸索無(wú)法再生導(dǎo)致永久性的損傷。這種對(duì)神經(jīng)纖維再生的抑制很大程度上是由于髓鞘相關(guān)蛋白阻礙軸索再生引起的(Mukhopadhyay等人1994；Xie?and?Zheng?2008)。髓鞘相關(guān)蛋白-A型勿動(dòng)蛋白(Nogo-A)、髓鞘磷脂相關(guān)糖蛋白(Myelin-associated?glycoprotein，MAG)和少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白(Oligodendrocyte-myelin?glycoprotein，OMgp)，位于有髓纖維的節(jié)旁區(qū)，是抑制神經(jīng)再生的髓鞘的主要組成蛋白(Domeniconi.，2002；Liu.，2002；Wang.，2002；Fournier.，2001；Chen.，2000；GrandPre.，2000；Prinjha.，2000；McKerracher.，1994；Mukhopadhyay.，1994)。它們通過(guò)共同的受體NgR，通過(guò)統(tǒng)一信號(hào)通路對(duì)神經(jīng)再生起著抑制作用。Tenasin-C(TNC)，Tenasin-R(TNR)，位于有髓纖維的朗飛氏節(jié)上，它們?cè)谡{(diào)節(jié)神經(jīng)再生及神經(jīng)可塑性中發(fā)揮著重要的作用(Apostolova等人2006；Xu等人2004；Rauch2004)。

近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，髓鞘有可能直接參與阿爾茨海默病的病理發(fā)生發(fā)展。在阿爾茨海默病早期的病人腦內(nèi)，甚至還沒(méi)有出現(xiàn)明顯臨床癥狀的時(shí)候，已經(jīng)能夠檢測(cè)到髓鞘的異常變化了。而且，髓鞘出現(xiàn)異常的區(qū)域恰恰是阿爾茨海默病病人最容易受影響的腦區(qū)(Benes?2004；Bartzokis?2004)。另外，研究發(fā)現(xiàn)，髓鞘在經(jīng)驗(yàn)依賴性的神經(jīng)突觸可塑性調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用(McGee等人2005)。這說(shuō)明髓鞘及其相關(guān)蛋白有可能亦是治療阿爾茨海默病或其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變的藥物靶點(diǎn)。

我們研究結(jié)果顯示Nogo-A、MAG、OMgp、TNC和TNR可能對(duì)阿爾茨海默病(Alzheimer’s?Disease，AD)病理起重要作用(見(jiàn)正文)。

DNA疫苗是一種新型疫苗。它利用載體表達(dá)編碼目的蛋白的DNA序列。DNA疫苗具有安全性好、穩(wěn)定性高、易設(shè)計(jì)、易大規(guī)模生產(chǎn)、并能誘導(dǎo)T細(xì)胞和B細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞和體液免疫等優(yōu)勢(shì)(Kutzler和Weiner，2008)。Nogo-A、MAG、OMgp、TNC和TNR抑制神經(jīng)再生。阻斷以上分子不僅可以促進(jìn)神經(jīng)再生，并對(duì)神經(jīng)元有保護(hù)作用。目前，在試圖消除分子的抑制性作用方面已經(jīng)取得了不同程度的成功(Huang等人1999；Sicotte等人2003；Xu等人2004；Bourquin等人2008)。發(fā)明人以前報(bào)道的利用編碼MAG、TN-R和Nogo-A重組DNA疫苗治療脊髓損傷的模型大鼠，發(fā)現(xiàn)該疫苗對(duì)脊髓損傷后大鼠的行為及神經(jīng)再生都有很強(qiáng)的改善作用。疫苗接種后8周將脊髓背側(cè)半橫斷損傷，與對(duì)照組相比，接種疫苗組產(chǎn)生了健康的皮質(zhì)脊髓束軸索的再生(CST)(Xu等人2004)。接種該DNA疫苗對(duì)神經(jīng)再生的促進(jìn)作用，在創(chuàng)傷性腦損傷的動(dòng)物模型上也得到了驗(yàn)證(張等人2008)。部分機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，編碼髓鞘相關(guān)蛋白的這種DNA疫苗可以調(diào)控棘突神經(jīng)生長(zhǎng)因子的表達(dá)，并通過(guò)其神經(jīng)保護(hù)作用實(shí)現(xiàn)(張等人2009)。