[發明專利]一種高純度D-熒光素的制備和純化方法

有效

• 申請號: 201110459845.3
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102532053A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 吳慧清;吳清平;張菊梅;李程思
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所;廣東環凱微生物科技有限公司
• 主分類號: C07D277/62
• 分類號: C07D277/62;C09K11/06
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.一種高純度D-熒光素的制備方法，它是由2-氰基-6-甲氧基苯并噻唑和鹽酸吡啶進行高溫脫甲基反應，然后提取脫甲基反應產物，經柱層析純化，最后將純化的脫甲基產物2-氰基-6-羥基苯并噻唑與D-半胱氨酸進行縮合反應生成D-熒光素，純化即得D-熒光素產品，其特征在于，所述的將純化的脫甲基產物2-氰基-6-羥基苯并噻唑與D-半胱氨酸進行縮合反應生成D-熒光素，純化即得D-熒光素產品是在充氮氣的條件下，2-氰基-6-羥基苯并噻唑與D-半胱氨酸在堿性條件下進行縮合反應，反應完畢后在充氮氣的條件下用有一定極性的非水溶性有機溶劑進行萃取，萃取后的水相用鹽酸進行酸化，分離沉淀物，沉淀物用溶水性有機溶劑進行洗滌，離心去上清，沉淀物真空干燥，即獲得高純度D-熒光素產品。

2.根據權利要求1所述的高純度D-熒光素的制備方法，其特征在于，所述的將純化的脫甲基產物2-氰基-6-羥基苯并噻唑與D-半胱氨酸進行縮合反應生成D-熒光素，純化即得D-熒光素產品，其具體步驟為：純化后的脫甲基產物2-氰基-6-羥基苯并噻唑(M176≥85％)與D-半胱氨酸鹽酸水合物按質量比1∶1～1.6在有一定極性的非水溶性有機溶劑中充氮混合，用飽和氮氣的0.1～2mol/L的碳酸鉀溶液在充氮氣的條件下，調節其pH至8～9，反應5～60min，反應完畢在充氮氣的條件下用有一定極性的非水溶性有機溶劑萃取，水相用0.2～1mol/L的鹽酸調節pH至1～3，分離沉淀物，再用體積比為1～5∶1的水和甲醇混合液洗滌沉淀物，10000～15000r/min離心，去上清，沉淀物經真空干燥，即可獲得高純度D-熒光素產品。

3.根據權利要求2所述的高純度D-熒光素的制備方法，其特征在于，所述的有一定極性的非水溶性有機溶劑為醇類、酯類或烴類或其混合物。?

4.根據權利要求2所述的高純度D-熒光素的制備方法，其特征在于，所述的在有一定極性的非水溶性有機溶劑中充氮混合中的有一定極性的非水溶性有機溶劑為二氯甲烷，所述的用有一定極性的非水溶性有機溶劑萃取中的有一定極性的非水溶性有機溶劑為乙酸乙酯或二氯甲烷或體積比為1∶1的乙酸乙酯和水混合液或體積比1～5∶1的二氯甲烷和水的混合液。

5.根據權利要求2所述的高純度D-熒光素的制備方法，其特征在于，所述的萃取次數為2～3次，所述的用體積比為1～5∶1的水和甲醇混合液洗滌沉淀物，洗滌次數為2次。

6.一種高純度D-熒光素產品的純化方法，其特征在于，將低純度的D-熒光素產品在充氮氣條件下，用堿性溶液溶解，然后在充氮氣的條件下用有一定極性的非水溶性有機溶劑進行萃取，萃取后的水相用鹽酸進行酸化，分離沉淀物，沉淀物用溶水性有機溶劑進行洗滌，離心去上清，沉淀物真空干燥，即獲得高純度D-熒光素產品。

7.根據權利要求6所述的高純度D-熒光素產品的純化方法，其特征在于，其具體步驟為：將低純度的D-熒光素產品用飽和氮氣的0.1～2mol/L的碳酸鉀溶液在充氮氣的條件下溶解，在充氮氣的條件下再用有一定極性的非水溶性有機溶劑萃取，萃取后的水相用0.2～1mol/L的鹽酸調節pH至1～3，分離沉淀物，再用體積比為1～5∶1的水和甲醇混合液洗滌沉淀物，10000～15000r/min離心，去上清，沉淀物真空干燥，即可獲得高純度D-熒光素產品。

8.根據權利要求7所述的高純度D-熒光素產品的純化方法，其特征在于，所述的有一定極性的非水溶性有機溶劑為醇類、酯類或烴類或其混合物。

9.根據權利要求8所述的高純度D-熒光素產品的純化方法，其特征在于，所述的有一定極?性的非水溶性有機溶劑為乙酸乙酯或二氯甲烷。

10.根據權利要求7所述的高純度D-熒光素的制備方法，其特征在于，所述的萃取次數為2～3次，所述的用體積比為1～5∶1的水和甲醇混合液洗滌沉淀物，洗滌次數為2次。?