[發明專利]一種呼吸道合胞病毒疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 201110458973.6
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN103182079A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 田平生;叢薇;陳明杰
• 申請（專利權）人: 上海澤潤生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/155
• 分類號: A61K39/155;A61P31/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體來說，涉及一種人呼吸道合胞病毒疫苗及其制備方法。

背景技術

呼吸道合胞病毒是一種單股負鏈非節段性的RNA病毒，屬于粘病毒科，肺炎病毒屬。內部核心是衣殼蛋白包裹的RNA，外層包被有源于宿主的脂質雙分子層，以及跨膜蛋白。病毒主要編碼11種蛋白質，三種跨膜蛋白與免疫保護及致病毒力相關，分別是融合蛋白F，黏附蛋白G，和小疏水蛋白SH。

呼吸道合胞病毒(Respiratory?syncytial?virus，RSV)，是在世界范圍內引起嬰幼兒下呼吸道感染的主要原因之一，其作為導致不足一歲嬰兒的肺炎和細支氣管炎的病因比其它所有的微生物病原體都嚴重。實際上，所有兒童在兩歲內均會被感染，且在較大一點的小孩和青年人身上發生再感染的頻率也較高。盡管大多數健康的成年人沒有嚴重的RSV感染的疾病，但是稍老年的病人以及無免疫應答的個體通常會遭受嚴重的感染甚至可能危及生命。現階段，抗病毒藥物只能一定程度上緩解臨床癥狀和縮短患病時間。因此，預防性給予抗病毒藥物仍然是最有效的臨床措施。而目前RSV還沒有理想的針對性疫苗。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于，為了克服現有技術中的缺陷，提供一種能夠在人體內產生更快、更高的免疫應答反應，且副反應少的的人用新型呼吸道合胞病毒疫苗。

本發明公開了一種利用Vero細胞來工業化大規模生產人呼吸道合胞病毒滅活疫苗的方法。本發明方法中病毒繁殖的細胞基質為Vero細胞，是世界衛生組織(WHO)準予用于人用生物制品的細胞基質。與二倍體細胞相比，具有易培養，并可滿足用發酵罐(微載體技術)大規模生產等明顯優勢，Vero細胞現在已經被國內外廣泛用于生產人用精制狂犬疫苗，乙腦疫苗等升級換代產品。

本發明公開了一種利用Vero細胞制備人呼吸道合胞病毒滅活疫苗的方法，包括下列步驟：

1.在培養基中靜止或立體吸附培養Vero細胞，獲得Vero細胞濃度達到10⁵-10⁷/ml的細胞基質培養液；

2.人呼吸道合胞病毒從發病2天的患者咽拭子采集，經常規分離，以0.01-0.2的感染劑量(M.O.I.)，將病毒接種到步驟1的細胞基質培養液中，培養6-10天；

3.用胰酶-EDTA消化獲得病毒-細胞培養懸液；

4.純化病毒制備疫苗。

本發明還公開了一種疫苗組合物，包括病毒蛋白含量100-200μg/劑的利用上述方法制備獲得的人用呼吸道合胞病毒疫苗和0.5mg/劑磷酸鋁佐劑。

具體實施方式

為了使本發明的技術手段、創作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合實施例對本發明作進一步闡述。這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。

實施例1

自液氮容器中，取出Vero細胞株(來源，中國藥品生物制品檢定所)，離心1000rpm，10分鐘，棄去原保存液，加入含有10％新生牛血清，0.20％水解乳蛋白的MEM營養液(pH用7％NaHCO₃調至6.8)置37℃培養，待細胞長成單層，然后用PBS洗滌，胰酶-EDTA消化，加入上述營養液，以1∶2分種率，每5天傳代1次，直至獲得批量生產需用的足夠細胞。