[發(fā)明專利]SecB介導(dǎo)的翻譯后靶向途徑的功能構(gòu)建及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110458204.6
• 申請日: 2011-12-31
• 公開（公告）號: CN102533627A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 刁劉洋;周佳海;楊晟;羅蘭·佛洛德爾
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院;中國科學(xué)院上海有機化學(xué)研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/63;C12N15/62;C12N15/31;C12P21/00;C07K19/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

1.一種在細菌中構(gòu)建SecB介導(dǎo)的翻譯后靶向途徑的方法，其特征在于，該方法包括：

在該細菌中共表達嵌合SecA蛋白和SecB蛋白，從而在該宿主中構(gòu)建SecB介導(dǎo)的翻譯后靶向途徑；

其中，所述嵌合SecA蛋白的“鋅結(jié)合基序”與該蛋白的其它部分的序列異源，且所述嵌合SecA蛋白能結(jié)合所述SecB蛋白。

2.一種增加細菌分泌蛋白效率的方法，其特征在于，該方法包括：

在該細菌中共表達嵌合SecA蛋白和SecB蛋白，從而在該宿主中構(gòu)建SecB介導(dǎo)的翻譯后靶向途徑，由此增加該細菌分泌蛋白的效率；

其中，所述嵌合SecA蛋白的“鋅結(jié)合基序”與該蛋白的其它部分的序列異源，且所述嵌合SecA蛋白能結(jié)合所述SecB蛋白。

3.一種提高細菌蛋白質(zhì)分泌能力的方法，其特征在于，該方法包括：

在該細菌中共表達嵌合SecA蛋白和SecB蛋白，從而在該宿主中構(gòu)建SecB介導(dǎo)的翻譯后靶向途徑，由此提高該細菌的蛋白質(zhì)分泌能力；

其中，所述嵌合SecA蛋白的“鋅結(jié)合基序”與該蛋白的其它部分的序列異源，且所述嵌合SecA蛋白能結(jié)合所述SecB蛋白。

4.如權(quán)利要求2～3中任一項所述的方法，其特征在于，所述蛋白選自天然分泌蛋白或人工分泌蛋白，其中天然分泌蛋白優(yōu)選為外源的天然分泌蛋白。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述外源的天然分泌蛋白選自水解酶或醫(yī)藥用蛋白，優(yōu)選為蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、抗體、干擾素、生長因子。

6.如權(quán)利要求4～5中任一項所述的方法，其特征在于，所述蛋白為融合蛋白，優(yōu)選為與麥芽糖結(jié)合蛋白融合而形成的融合蛋白。

7.如權(quán)利要求1～6中任一項所述的方法，其特征在于，所述細菌為天然缺失secB基因的細菌，且所述細菌天然存在secA基因。

8.如權(quán)利要求1～7中任一項所述的方法，其特征在于，所述細菌為選自芽胞桿菌屬(Bacillus)、棒桿菌屬(Corynebacterium)、分支桿菌屬(Mycobacterium)、鏈霉菌屬(Streptomyces)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、鏈球菌屬(Streptococcus)或梭菌屬(Clostridium)的細菌。

9.如權(quán)利要求1～8中任一項所述的方法，其特征在于，所述細菌選自枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)、地衣芽胞桿菌(Bacillus?licheniformis)、巨大芽胞桿菌(Bacillus?megaterium)、短芽胞桿菌(Bacillus?brevis)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amyloliquefaciens)、短小芽孢桿菌(Bacillus?pumilus)或蘇云金芽胞桿菌(Bacillus?thuringiensis)。

10.如權(quán)利要求1～9中任一項所述的方法，其特征在于，所述在該細菌中共表達嵌合SecA蛋白和SecB蛋白包括：

構(gòu)建含嵌合secA基因的表達載體和含secB基因的表達載體，其中，所述嵌合secA基因為人工改造所述細菌secA基因而得，即所述細菌secA基因“鋅結(jié)合基序”的編碼序列被外源secA基因“鋅結(jié)合基序”的編碼序列所替換，從而具備結(jié)合所述SecB蛋白的能力；

用所述含嵌合secA基因的表達載體和含secB基因的表達載體轉(zhuǎn)化該細菌，從而在該細菌中共表達嵌合SecA蛋白和SecB蛋白。

11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述secB基因來自于與所述細菌不同種屬的細菌。

12.如權(quán)利要求10～11中任一項所述的方法，其特征在于，所述secB基因與所述secA基因的“鋅結(jié)合基序”的編碼序列來源于相同種屬的細菌。

13.如權(quán)利要求10～12中任一項所述的方法，其特征在于，所述的外源secA基因的“鋅結(jié)合基序”為外源SecA蛋白羧基末端最后18～60個氨基酸。

14.如權(quán)利要求10～13中任一項所述的方法，其特征在于，所述外源secA基因為大腸桿菌secA基因或流感嗜血桿菌secA基因。