[發明專利]一種高通量篩選誘導植物抗蟲性化學激發子的方法

有效

• 申請號: 201110457879.9
• 申請日: 2011-12-31
• 公開（公告）號: CN102565424A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 婁永根;辛肇軍;宇兆男
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/63
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

技術領域

本發明涉及誘導植物抗蟲性化學激發子的篩選方法，尤其涉及一種高通量的篩選方法。

背景技術

植物的誘導抗性是植物抵御病蟲害危害的一個重要方面。由于其具有廣譜、持久的抗病蟲特性，因此已日益受到各國科學家的高度重視。誘導抗性作為植物免疫體系的功能，它具有非專化性、系統性和持久性以及無公害性的特征。它的應用可達到多抗、高抗和無公害等多種目標。將病蟲害控制對策轉向互作的內系統，開發植物內在抗性機制來防治病蟲害，是現代植物病蟲害防治的一條重要途徑。

植物的誘導抗性起始于植物對來自于病蟲激發子的識別，通過激活植物體內多種，如茉莉酸、水楊酸、乙烯等信號轉導途徑，最終導致植物防御反應。在利用植物誘導抗蟲性方面，一些研究已經表明利用一些小分子信號化合物可以激活植物的抗蟲反應，從而達到控制害蟲的目的。如在蕃茄上噴施茉莉酸，可增強蕃茄對多種鱗翅目害蟲的抗性。由于這些小分子化合物的開發是基于植物中的信號分子，并且其對害蟲的控制是通過植物而發揮作用，因此相比于直接作用于昆蟲的殺蟲劑具有更好的環境安全性。因此，開發基于能激活植物誘導抗蟲性的小分子化合物的綠色農藥，將是今后控制害蟲危害的一條重要并且安全有效的途徑。然后，目前對于誘導植物抗蟲性的小分子化合物，即化學激發子的篩選，方法繁瑣、生物測定工作量大，并且效率低。

為此，本發明提供了一種高通量篩選誘導植物抗蟲性化學激發子的方法。利用這種方法，每人每天可以篩選100種以上的小分子化合物，這不僅大大提高了篩選效率，而且可以大大節約傳統篩選方法中所需要的大量昆蟲的飼養以及大量的昆蟲生物測定。

發明內容

本發明的目的是為了解決上述背景技術存在的不足，提供一種高通量篩選誘導植物抗蟲性化學激發子的方法，該方法具有操作簡單、分析快速準確、靈敏度高的特點。

為實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案：?

本發明的有益效果是，本發明利用所構建水稻轉基因品系中GUS蛋白或GFP熒光蛋白活性指標判定小分子化合物的生物活性，可有效篩選出具有生物活性的小分子化合物，篩選方法簡單、高效，大大減少生物測定的工作量。

附圖說明

附圖1為轉基因所用的pCAMBIA1391質粒圖。

具體實施方式

本發明誘導植物抗蟲性化學激發子的高通量篩選方法，利用不同的小分子化合物處理轉基因構建的水稻品系，根據轉基因品系中GUS蛋白或GFP熒光蛋白活性的變化判定小分子化合物是否具有生物活性。

轉基因品系是將抗蟲相關基因的啟動子與GUS蛋白或GFP熒光蛋白基因相連構建啟動子表達載體，然后利用農桿菌侵染的方法通過轉基因獲得。

所選用的啟動子為誘導型抗蟲相關基因啟動子。

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明范圍。

實施例1：水稻揮發物芳樟醇可以吸引褐飛虱重要天敵稻虱纓小蜂，以水稻芳樟醇合成酶基因OsLIS為例，介紹本發明的操作步驟。

1.?芳樟醇合成酶基因OsLIS啟動子序列克隆及pCAMBIA-LISp載體構建

根據OsLIS基因序列（GenBank數據庫登錄號為AK110925）轉錄起始位點上游1500bp設計引物：

正向引物為OsLISP-F:CGAAGCTTCGTGTTCATGTACCCTTTT，反向引物為OsLISP-R:AGGTCGACGTGGCAAACCATAGATAAGC，為方便下一步的克隆，劃線處分別設計HindⅢ和SalⅠ酶切位點。以水稻基因組DNA為模板進行PCR擴增，擴增產物命名為LISp。將LISp和pCAMBIA1391質粒分別用HindⅢ和SalⅠ進行雙酶切，將酶切產物電泳，割膠回收大片段，利用T4連接酶將兩片段過夜連接，使LISp與pCAMBIA1391質粒中的GUS基因融合，獲得含融合序列LISp::GUS的載體pCAMBIA-LISp。

2.?轉含LISp::GUS序列水稻品系的獲得