[發(fā)明專利]用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110457097.5
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102533549A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮傳良;竇曉秋;張荻
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C07D233/64;C07K5/065
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料，其特征在于，由低分子量凝膠因子G1和G2自組裝形成；

所述低分子量凝膠因子的結(jié)構(gòu)式為：

其中：當(dāng)時(shí)，所述低分子量凝膠因子為G1；當(dāng)時(shí)，所述低分子量凝膠因子為G2。

2.一種制備如權(quán)利要求1所述的用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1，分別取1，4-環(huán)己烷二甲酸、L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽、組胺、BOC-L-賴氨酸、N，N′-羰基二咪唑、無水1-羥基-苯并-三氮唑、二氯亞砜、三氟乙酸、三乙胺；

步驟2，將1，4-環(huán)己烷二甲酸溶于二氯亞砜中攪拌反應(yīng)；

步驟3，將步驟2所得反應(yīng)液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后，真空干燥得1，4-環(huán)己烷二酰氯；

步驟4，將L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽的無水二氯甲烷溶液冷卻，加入三乙胺，再加入1，4-環(huán)己烷二酰氯的無水二氯甲烷溶液，得反應(yīng)溶液，將反應(yīng)溶液緩慢升至室溫并攪拌；

步驟5，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)反應(yīng)液，加入去離子水，過濾收集沉淀，所得沉淀用乙醇重結(jié)晶，過濾并于烘箱中干燥，得產(chǎn)物1，4-環(huán)己烷苯丙氨酸甲酯；

步驟6，向1，4-環(huán)己烷苯丙氨酸甲酯的甲醇溶液中加入2M氫氧化鈉溶液，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌反應(yīng)，用3M鹽酸溶液將反應(yīng)液pH值調(diào)至小于3，過濾收集所生成沉淀并真空干燥，得到中間體1，4-環(huán)己烷苯丙氨酸；

步驟7，將中間體1，4-環(huán)己烷苯丙氨酸、酰化催化劑N，N′-羰基二咪唑、無水1-羥基-苯并-三氮唑溶于二甲基亞砜中，并加入三乙胺，在室溫下攪拌活化，活化后將組胺加入上述反應(yīng)液中進(jìn)行酰胺化反應(yīng)；

步驟8，將步驟7所得反應(yīng)液倒入去離子水中，得到凝膠狀白色沉淀，過濾收集所生成沉淀并真空干燥，得到低分子量凝膠因子G1；

步驟9，將中間體1，4-環(huán)己烷苯丙氨酸、酰化催化劑N，N′-羰基二咪唑、無水1-羥基-苯并-三氮唑溶于二甲基亞砜中，并加入三乙胺，在室溫下攪拌活化，活化后將BOC-L-賴氨酸加入上述反應(yīng)液中進(jìn)行酰胺化反應(yīng)；

步驟10，將步驟9所得反應(yīng)液倒入去離子水中，得到白色沉淀，過濾收集所生成沉淀并真空干燥，得到產(chǎn)物BOC-G2；

步驟11，將BOC-G2溶于無水二氯甲烷中進(jìn)行攪拌，并加入三氟乙酸在室溫下進(jìn)行水解；

步驟12，將步驟11所得反應(yīng)液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，并用二氯甲烷和甲苯分別對產(chǎn)物進(jìn)行沖洗；將二氯甲烷和甲苯旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后，收集所生成產(chǎn)物并真空干燥，得到低分子量凝膠因子G2；

步驟13，將前述步驟得到的低分子量凝膠因子G1和G2通過調(diào)節(jié)溶劑溫度或調(diào)節(jié)溶劑pH值，自組裝形成用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料的制備方法，其特征在于，所述步驟2中，1，4-環(huán)己烷二甲酸及二氯亞砜中的摩爾比為1∶4.4，反應(yīng)溫度為95～100℃，反應(yīng)時(shí)間為3～4小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料的制備方法，其特征在于，所述步驟4中，1，4-環(huán)己烷二酰氯、L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽和三乙胺的摩爾比為1∶2∶6，所述冷卻為冷卻到0℃，所述攪拌的時(shí)間為12～16小時(shí)。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料的制備方法，其特征在于，所述步驟6中，攪拌反應(yīng)時(shí)間為20～24小時(shí)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料的制備方法，其特征在于，所述步驟7中，1，4-環(huán)己烷苯丙氨酸、N，N′-羰基二咪唑、無水1-羥基-苯并-三氮唑、三乙胺及組胺的摩爾比為1∶2∶2∶2.3∶2，活化時(shí)間為1.5～2小時(shí)，酰胺化時(shí)間為16～20小時(shí)。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料的制備方法，其特征在于，所述步驟9中，1，4-環(huán)己烷苯丙氨酸、N，N′-羰基二咪唑、無水1-羥基-苯并-三氮唑、三乙胺及BOC-L-賴氨酸的摩爾比為1∶2∶2∶2.3∶2，活化時(shí)間為1.5～2小時(shí)，酰胺化時(shí)間為16～20小時(shí)。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于一類細(xì)胞培養(yǎng)和脫附的納米凝膠支架材料的制備方法，其特征在于，所述步驟11中，攪拌反應(yīng)時(shí)間為3～4小時(shí)。