[發(fā)明專利]膠乳增強免疫比濁法測定血清或尿液中心臟型脂肪酸結合蛋白的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110454515.5
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN102628864A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設計）人: 陳婧;高愛民;蔡華雅;劉希
• 申請（專利權）人: 北京九強生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/31
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉;朱慧寧

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)學檢驗學領域，涉及一種免疫檢測試劑盒，特別地，本發(fā)明涉及一種測定血清或尿液中心臟型脂肪酸結合蛋白的試劑盒。?

背景技術

脂肪酸結合蛋白(FABP)是一族分子量為14-16kD的胞內蛋白質，至少包括肝、小腸、心、腦、腎、骨骼肌、脂肪組織、回腸、表皮的9種類型，各類型之間具有不同的免疫學差別。心臟型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)是存在于心肌細胞胞漿內的可溶性蛋白質，分子量15kD，占心肌內蛋白含量的4±8％，由132個氨基酸構成，呈酸性(pI＝5)，參與細胞脂肪酸的攝取、轉運和代謝。H-FABP在心肌細胞胞漿與血液中的比值為200,000∶1，在骨骼肌的濃度不到心肌里的十分之一，在遠端腎小管、腦組織的特殊部位、乳腺、胎盤內含量更低。而肌紅蛋白在骨骼肌的濃度是心肌里的兩倍。正常條件下血流中幾乎檢測不到H-FABP，極微量的H-FABP可能與破壞的骨骼肌持續(xù)釋放H-FABP有關，當心肌細胞受損時，H-FABP釋放并迅速進入血循環(huán)，因與其它FABP在免疫學上具有特異性，不會發(fā)生交叉反應，故對心肌損傷的診斷特異性較強。另外，H-FABP通過腎臟代謝，以原形排出，所以腎功能不全時血里H-FABP的濃度會升高。?

急性心肌梗死(AMI)是一種嚴重威脅人類健康的疾病。自20世紀80年代中后期早期溶栓的應用，使AMI的治療發(fā)生了革命性轉變，病死率顯著下降，而實施上述再灌注治療的前提，是在AMI發(fā)病的早期迅速確診。為此，人們一方面使用肌鈣蛋白(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)等傳統(tǒng)的診斷指標，另一方面則致力于尋求更敏感、更特異的血清(漿)新標志物。心型脂肪酸結合蛋白就是一種新的AMI早期診斷標志物，其作為AMI早期的診斷指標，受骨骼肌損害的影響?極小，對心肌損傷的診斷有顯著的特異性，在急性心肌梗死患者發(fā)病早期，特別是在發(fā)病的1-3個小時內，血液和尿中H-FABP的濃度就有明顯的升高，6-8小時內將達到高峰，24-30小時后回落到正常。因此H-FABP在AMI發(fā)生后的6個小時內，較目前常用的肌紅蛋白(MYO)、肌鈣蛋白和CK-MB心肌梗死標志物，具有更高的敏感性、特異性和準確性，能更早地提示心肌細胞的損傷情況，對早期快速排除是否由于心肌梗死引發(fā)的胸痛，以及判斷心肌梗死的嚴重程度等具有重要的臨床意義。?

目前，已知心臟型脂肪酸結合蛋白測定方法有放射免疫法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、免疫層析等，但臨床應用的預期效果都不理想，如放射免疫分析步驟繁瑣，試劑價格昂貴，需使用配套的儀器且存在放射性污染；免疫層析多為定性檢測，靈敏度低；酶聯(lián)免疫吸附法存在檢測時間長，操作復雜，重復性差、不適用于急診和臨床病人及時診斷的需要。膠乳增強免疫比濁法具有操作簡單、快速、靈敏度高、可應用于自動生化分析儀等優(yōu)點，如能開發(fā)出可在全自動生化分析儀上使用的免疫比濁試劑用于檢測血清或尿液中的心臟型脂肪酸結合蛋白，將為臨床AMI的診斷及治療提供強有力的支持。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足和缺點，提供一種具有高靈敏度和寬線性范圍的心臟型脂肪酸結合蛋白檢測試劑盒，同時還具有測值準確，操作簡單、快速可用于門急診檢測且儀器適用面廣等優(yōu)點，所述試劑盒包括試劑R1、試劑R2和校準品，其中，?

a)試劑R1包含防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、反應促進劑、電解質和緩沖液；?

b)試劑R2包含結合有抗心臟型脂肪酸結合蛋白單克隆抗體和多克隆抗體的膠乳顆粒、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、電解質和緩沖液；?

c)校準品包含防腐劑、穩(wěn)定劑、電解質、心臟型脂肪酸結合蛋白純品和緩沖液。?

特別地，本發(fā)明涉及一種單多抗復合的膠乳增強免疫比濁試劑用?于測定血清或尿液中心臟型脂肪酸結合蛋白，包括試劑R1、試劑R2和已知濃度的心臟型脂肪酸結合蛋白抗原校準品，其中：a)本發(fā)明所述試劑盒的試劑R1是一種使樣本中H-FABP特異的抗原位點充分暴露，有利于與抗心臟型脂肪酸結合蛋白抗體充分結合的，包含占其質量百分比為：0.01％～1.0％防腐劑、0.05％～5.0％的穩(wěn)定劑、0.01％～3.0％的表面活性劑、0.01％～10.0％的反應促進劑、0.01％～5.0％的電解質、pH?6.5～8.5的10～200mmol/L的緩沖液；?