[發明專利]一種改進逆轉錄酶性能的試劑和方法

無效

• 申請號: 201110453591.4
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN103184198A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 思洛生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種改進逆轉錄酶性能的試劑，其特征在于，所述試劑為巰基封閉劑或二硫鍵還原劑或二者組合物。

2.如權利要求1所述的試劑，其特征在于，所述試劑為巰基封閉劑。

3.如權利要求2所述的試劑，其特征在于，所述的巰基封閉劑為碘乙酸、碘乙酰胺、溴乙酸、甲基甲硫醇磺酸鈉(Methyl?methanethiosulfonat，MMTS)、N-乙基馬來酰亞胺(N-ethylmaleimide，NEM)中的至少一種。

4.如權利要求3所述的試劑，其特征在于，所述巰基封閉劑為碘乙酸，最終使用濃度為1-10mM。

5.如權利要求3所述的試劑，其特征在于，所述巰基封閉劑為碘乙酰胺，最終使用濃度為0.5-50mM。

6.如權利要求1所述的試劑，其特征在于，所述試劑為二硫鍵還原劑。

7.如權利要求6所述的試劑，其特征在于，所述二硫鍵還原劑為2-巰基乙醇、半胱氨酸·鹽酸、二硫蘇糖醇、三(2-羧乙基)膦·鹽酸鹽、2-巰基乙胺·鹽酸、二硫赤酰糖醇中的至少一種。

8.如權利要求7所述的試劑，其特征在于，所述二硫鍵還原劑為二硫蘇糖醇，最終使用濃度為1-50mM。

9.如權利要求7所述的試劑，其特征在于，所述二硫鍵還原劑為2-巰基乙醇，最終使用濃度為5-300mM。

10.如權利要求7所述的試劑，其特征在于，所述二硫鍵還原劑為三(2-羧乙基)膦·鹽酸鹽，最終使用濃度為0.1-20mM。

11.如權利要求1所述的試劑，其特征在于，所述試劑為巰基封閉劑和二硫鍵還原劑的組合物。

12.如權利要求11所述的組合物，其特征在于，所述巰基封閉劑選自碘乙酸、碘乙酰胺、溴乙酸、甲基甲硫醇磺酸鈉、N-乙基馬來酰亞胺中的至少一種，所述二硫鍵還原劑選自2-巰基乙醇、半胱氨酸·鹽酸、二硫蘇糖醇、三(2-羧乙基)膦·鹽酸鹽、2-巰基乙胺·鹽酸、二硫赤酰糖醇中的至少一種。

13.如權利要求1-12中任一項的試劑，其特征在于，所述試劑任選還含有緩沖劑，任選還含有非離子型去污劑，任選還含有金屬鹽，任選還含有金屬離子螯合劑，任選還含有選自多元醇、多糖的一種或多種試劑。

14.如權利要求12所述的試劑，其特征在于，所述多元醇選自甘油、甘露醇、山梨醇、肌醇、硫醇、聚乙二醇、木糖醇中的至少一種。

15.如權利要求12所述的試劑，其特征在于，所述多糖選自葡萄糖、葡聚糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、果糖、蔗糖、海藻糖、麥芽糖、菊糖中的至少一種。

16.一種改進逆轉錄酶性能的方法，其特征在于，包括步驟：將權利要求1-15中任一項的試劑配置成特定濃度的母液，然后將逆轉錄酶溶液加入到母液中，或將母液加入到逆轉錄酶溶液中，使所述試劑濃度達到最終使用濃度。

17.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述試劑的母液濃度為最終使用濃度的2-100倍。

18.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述逆轉錄酶為M-MLV(莫洛尼鼠白血病病毒逆轉錄酶)、RSV(勞氏肉瘤病毒逆轉錄酶)，RAV(勞氏伴隨病毒逆轉錄酶)、AMV(鳥類成髓細胞白血病病毒)、HIV(人免疫缺陷病毒逆轉錄酶)中的至少一種。

19.如權利要求18所述的逆轉錄酶，其特征在于，所述逆轉錄酶為M-MLV逆轉錄酶。

20.如權利要求16所述的方法，其特征在于，用所述方法得到的逆轉錄酶具有選自下組的一項或多項特性：

(a)RNase?H活性降低或顯著降低；

(b)RNA或DNA依賴的DNA合成酶活性耐熱性能提高或顯著提高；

(c)合成的cDNA更長、產量更高；

(d)靈敏度提高。

21.一種試劑盒，所述試劑盒含有權利要求1-20中任一項的試劑和逆轉錄酶。

22.一種試劑盒，所述試劑盒含有權利要求1-15中任一項的用于改進逆轉錄酶性能的試劑。

23.一種試劑盒，所述試劑盒含有通過權利要求1-20中任一項所述的試劑和方法得到的逆轉錄酶。