[發明專利]應用真菌發酵液誘導沉香樹快速形成沉香的方法

無效

• 申請號: 201110453312.4
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN102550311A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 馬華明;梁坤南;周再知;黃桂華;林明平
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院熱帶林業研究所
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06;A01G1/04
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及一種應用真菌發酵液誘導沉香樹快速形成沉香的方法。

背景技術

沉香是我國、日本、印度以及東南亞國家的傳統名貴藥材和世界知名名貴香料。所謂沉香，為瑞香科沉香屬的部分種和擬沉香屬的部分種以自然、微生物或人工方式使之發生生物化學過程形成的產品，能生產沉香的植物統稱為沉香樹。沉香屬有18種，主要分布于印度、中國、東南亞以及馬來半島。我國有土沉香和云南沉香兩個種。

現有人工結香方法有五種。第一、砍傷法：樹干用刀造成3～4cm傷口，幾年后在傷口處形成沉香。第二、打釘法：鐵釘打入樹干任其生銹，爾后產香。第三、鑿洞法：樹干用鑿孔機開孔洞，爾后產香。第四、化學刺激法：在樹干上開一小孔，在小孔中滴入乙烯利、甲酸、冰醋酸等化學物質，刺激沉香的形成。第五、接菌法：樹干用鑿孔機開孔洞接種真菌，真菌寄生在沉香樹上促使木材薄膜細胞貯存物質產生生理變化，最后在組織中形成香脂。前三種方法被稱為傳統方法，這三種方法費時費工、時間長、產量低且質量不穩定，但其要求的技術門檻低，仍有不少香農延用此技術；化學刺激法所產生沉香由于安全問題不宜入藥。國內外近年來的研究認為，接菌法促進沉香形成具有安全有效、時間短的優點，形成沉香大約只需要2年的時間。但由于接菌的成功與否受環境條件影響較大，且形成沉香的范圍僅局限在接菌四周，為提高產量，需要在樹干打很多菌孔。綜上所述，現有人工結香方法仍存在缺陷，不利于工業產業上廣泛應用推廣。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的不足，提供一種應用真菌發酵液誘導沉香樹快速形成沉香的方法，利用該方法生產沉香時間短、產量高，有利于工業化生產。

本申請的發明人經研究發現，人工接菌后真菌的代謝產物是誘導沉香樹形成沉香的關鍵因素，同時，本申請的發明人還發現，再育鐮刀菌(Fusarium?proliferatum)為沉香樹結香部位的十余種真菌之一，其代謝產物能大大促進沉香樹結香。因此，本發明的技術方案是：直接滴注再育鐮刀菌的發酵液誘導沉香樹形成沉香。這種技術手段既簡便又能避免接菌過程受環境影響的缺陷。同時，發酵液在植物的蒸騰作用的帶動下，能快速地遍布樹體，既促進沉香的快速形成又提高沉香的產量。

本發明的應用真菌發酵液誘導沉香樹快速形成沉香的方法包括以下步驟：

1)再育鐮刀真菌的培養

將由沉香樹結香部位分離得到的鐮刀真菌自低溫保藏的斜面試管轉接于盛有PDA培養基的培養皿中，于26～28℃下培養3～5天后，待菌絲長滿培養基后再轉接于盛有PDA液體培養基的三角瓶中，再置于搖床上震蕩培養1周；

2)發酵液的獲取

從搖床上取下三角瓶，用紗布濾去菌絲體，濾液即為發酵液；

3)滴注發酵液

將發酵液分裝于輸液器具中，在沉香樹干上鉆孔，將輸液器具中的發酵液注射經鉆孔滴注式輸入樹體。

優選地，由沉香樹結香部位分離再育鐮刀真菌的步驟包括：

a)取樣：在沉香樹結香部位取樣；

b)樣品消毒：在0.1％的升汞溶液中浸泡1min，無菌水清洗后，75％乙醇中浸泡1min，無菌水清洗；

c)菌種的分離純化：在超凈工作臺上用無菌剪刀挑取樣品中心部分，置于PDA培養基中，26～28℃恒溫培養，待長出菌絲后，挑取平板中單一菌落的菌絲轉接至新的平板，繼續26～28℃恒溫培養；

d)將步驟c)獲得的菌種進行鑒定，選取其中的再育鐮刀菌(Fusarium?proliferatum)轉接試管斜面進行低溫保藏。再育鐮刀菌在PDA培養基上28℃培養3天，菌落呈圓形，菌絲體白色毛絮狀，后期中央菌絲體由白色轉為紫色。大型分生孢子呈鐮刀形或紡錘形，無色透明，具2～5個隔膜；小型分生孢子呈卵形、梨形或腎形，無色透明。

優選地，滴注發酵液的沉香樹干為樹齡5年以上的土沉香、奇楠沉香或馬來沉香。

優選地，在春夏季天氣晴朗的時候滴注發酵液。

優選地，鉆孔在沉香樹干的同一高度的東西兩側進行。

優選地，自首次滴注發酵液2個月后再滴注一次發酵液。

優選地，所述輸液器具包括輸液袋、輸液軟管和針頭；輸液軟管固定在輸液袋下方，呈倒“Y”字形，上方為主液管，下方為兩個分支輸液管，主液管上設流速控制器，分支輸液管末端連接針頭。

優選地，鉆孔的孔徑與針頭的孔徑匹配。

與現有技術相比，本發明產生的顯著效果是：

1.結香周期短：沉香形成的時間縮短為1年；