[發明專利]一種豬支原體肺炎滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201110452153.6
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN103182076A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 車艷杰;王海燕;張鋒;王勇鶼;閆國暉;高玉梅;石松;高潔;趙亞榮
• 申請（專利權）人: 北京大北農科技集團股份有限公司;福州大北農生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;A61P11/00;A61P31/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于獸醫生物新醫藥技術領域，涉及一種豬支原體肺炎滅活疫苗及其制備方法。?

背景技術

豬支原體肺炎，又稱豬喘氣病或豬地方流行性肺炎，是由豬肺炎支原體引起的一種接觸性慢性呼吸道傳染病。患病豬的主要臨床癥狀為咳嗽和氣喘，體溫基本正常，生長遲緩，飼料轉化率低。剖檢時，以肺部病變為主，尤以兩肺心葉，中間葉和尖葉出現胰樣變和肉樣變為其特征。該病存在于世界各地，其死亡率雖然不高，但由于流行的廣泛性、長期性和消耗性，可使飼料轉化率降低，并引起豬的多種并發病，是造成養豬業經濟損失的最重要的疾病之一。?

目前，該病的控制有改善飼養條件、藥物治療和疫苗免疫3種方式。改善飼養條件和藥物治療都不能根除該病的發生，且抗生素治療存在耐藥性問題，疫苗免疫是首選、有效的控制方式。國內自主研發的疫苗只有弱毒活疫苗，包括中國獸醫藥品監察所研制的兔肺凍干苗、乳兔肌肉凍干苗及雞胚卵黃囊凍干苗，南京天邦和江蘇省農科院共同研制的豬支原體肺炎168株活疫苗。弱毒活疫苗由于需要胸腔接種，所以不易于推廣普及；國外已有多家獸藥公司研發生產了豬支原體肺炎滅活疫苗，如梅里亞有限公司、美國先靈葆雅動物保健公司和美國富道公司等，均通過肌肉注射進行接種，易于操作，但其價格較?高。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種豬支原體肺炎滅活疫苗，該疫苗免疫效果顯著，能夠有效預防豬肺炎支原體疾病發生，填補了國內自主研發豬支原體滅活疫苗空白，解決了弱毒活疫苗操作復雜、不易推廣的問題。?

本發明的另一目的是提供該豬支原體肺炎滅活疫苗的制備方法。?

本發明的目的是通過如下技術方案實現的：?

本發明提供一種豬支原體肺炎滅活疫苗，該疫苗所用的菌種為豬肺炎支原體(Mycoplasma?hyopneumoniae)DJ-166株，菌種的保藏號為CGMCC?No.4545，上述菌種經滅活后作為水相，佐劑作為油相，水相與油相按配比乳化而成。?

其中，所述的佐劑為礦物油佐劑。?

進一步，礦物油佐劑為白油、206佐劑、50V佐劑(即MontanideISA?50V佐劑)中的任一種。?

本發明的豬支原體肺炎滅活疫苗中水相與油相按1∶1～1∶3體積配比進行乳化。?

進一步，水相與油相按1∶1體積配比進行乳化。?

本發明制備的疫苗每頭份疫苗抗原含量不小于100ug。?

進一步，每頭份疫苗抗原含量為100～500ug。?

更進一步，每頭份疫苗抗原含量為300ug。?

本發明免疫接種方式為每頭豬1次肌肉注射2.0毫升，免疫期為?6個月；種豬群每半年重復接種一次。?

本發明還提供了該豬支原體肺炎滅活疫苗的制備方法，其制備步驟如下：?

(1)制備豬肺炎支原體DJ-166株菌液，培養至菌液pH值降至6.5～7.0；?

A.菌液培養?

按培養基量的8％～10％接種菌液，置37±1℃培養5～9日，待培養基顏色變黃、呈輕度渾濁，pH值降至6.50～7.00之間收獲菌液。?

B.純粹檢驗?

按現行《中國獸藥典》附錄進行純粹檢驗，應純粹。?

C.CCU測定?

將收獲菌液接種液體培養基，并進行10倍系列稀釋至10^-12，置37±1℃培養14日，活菌滴度應≥10⁸CCU/mL。?

(2)將步驟(1)得到的菌液進行濃縮、純化，并進行滅活；?

A.濃縮、純化?

將菌液以10000r/min離心30分鐘，棄掉上清液，沉淀菌體用PBS(pH7.2～7.4)緩沖液懸浮，配制成為原培養物體積1/100菌懸液，-40℃保存。?

B.滅活?

經濃縮的菌液加入1.0％的硫柳汞溶液使其終濃度為0.01％，混合均勻，2～8℃放置12～24小時，期間振搖1～3次，然后在冰水浴上超聲波裂解4～6次，每次1分鐘，功率250～300W，超聲5～8秒，間?歇5～8秒。?

(3)將滅活后的菌液進行半成品檢驗，包括：無菌檢驗，滅活檢驗和蛋白濃度測定；?

A.滅活檢驗?