[發(fā)明專利]一種豬圓環(huán)病毒、豬細(xì)小病毒、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒三聯(lián)病毒樣顆粒疫苗及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110452014.3
• 申請(qǐng)日: 2011-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102488895A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂鳳林;潘玉竹;曹政
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K39/295
• 分類號(hào): A61K39/295;A61K48/00;C12N15/79;A61P31/14;A61P31/20;A61K39/12;A61K39/23
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發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，涉及一種豬圓環(huán)病毒、豬細(xì)小病毒、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒三聯(lián)病毒樣顆粒疫苗及其制備方法，特別涉及一種以含有2-型豬圓環(huán)病毒的核衣殼蛋白、豬細(xì)小病毒VP2蛋白抗原表位、以及豬繁殖與呼吸綜合癥病毒Gp5蛋白組成的三聯(lián)病毒樣顆粒疫苗(Trivalent?VLP)及其制備方法。?

背景技術(shù)

豬圓環(huán)病毒(Porcine?circovirus，PCV)將導(dǎo)致豬群免疫力下降，并與豬斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合癥(Postweaning?Multisystemic?Wasting?Syndrome，PMWS)、豬皮炎及腎病綜合癥(Porcine?Dermatitis?and?Nephropathy?Syndrome，PDNS)、豬繁殖障礙(Porcine?reproductive?failure)、豬呼吸道疾病綜合征(Porcine?Respiratory?Disease?Syndrome，PRDC)、豬增生性壞死性肺炎(Porcine?Necrotizing?Pneumonia，PNP)、豬先天性振顫(Porcine?Congenital?Tremor，CT)等多種疾病有聯(lián)系。豬圓環(huán)病毒(PCV)是1974年在一種體外培養(yǎng)的豬腎細(xì)胞系PK-15中首次發(fā)現(xiàn)的，當(dāng)時(shí)認(rèn)為是一種細(xì)胞培養(yǎng)的污染物，因?yàn)槠洳⒉痪哂袑?dǎo)致細(xì)胞病變等典型的病毒樣作用，所以稱為小病毒樣核酸污染物。隨后陸續(xù)有報(bào)道指出這種小病毒樣核酸污染物其實(shí)是一種病毒，這種病毒是一種小型無(wú)包膜的12面體病毒，核心包含一個(gè)單股環(huán)狀DNA基因組，不導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)病及傳代培養(yǎng)的細(xì)胞發(fā)生病變，并正式將其命名為豬圓環(huán)病毒(Procine?Circovirus，PCV)。但1994年Hines等首先報(bào)道了在患有先天性振顫(Congenital?Tremor)的仔豬中發(fā)現(xiàn)了PCV樣病毒(PCV-like?Virus)，1995年Allan等人也在幾例豬的死胎中發(fā)現(xiàn)了PCV的抗體，這將PCV與各種疾病聯(lián)系到了一起。之后對(duì)PCV的報(bào)道漸漸指向了一種分離自病豬而不是細(xì)胞培養(yǎng)物的“新型豬圓環(huán)病毒(Novel?PCV)”。隨著對(duì)該新型PCV的深入研究，發(fā)現(xiàn)從基因組到血清型都與傳統(tǒng)的PCV存在差異，隨之國(guó)際上將這種新型的、可以致病的豬圓環(huán)病毒命名為2-型豬圓環(huán)病毒(PCV-2)，同時(shí)將細(xì)胞培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)的非致病性豬圓環(huán)病毒命名為1-型豬圓環(huán)病毒(PCV-1)。?在臨床中，PCV-2主要感染5-12周齡的小豬，病豬表現(xiàn)為生長(zhǎng)緩慢、被毛粗亂、營(yíng)養(yǎng)不良、呼吸困難、黃膽、粘膜蒼白，可成為僵豬，嚴(yán)重可導(dǎo)致死亡。有證據(jù)表明，PCV-2的致病性主要是由于其對(duì)免疫系統(tǒng)的損傷造成的，研究發(fā)現(xiàn)，感染PCV-2的病豬淋巴細(xì)胞會(huì)發(fā)生明顯減少。Darwich等報(bào)道，患有豬斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合癥(Postweaning?Multisystemic?Wasting?Syndrome，PMWS)的病豬出現(xiàn)CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞減少，CD8+T淋巴細(xì)胞沒(méi)有發(fā)生明顯變化，而典型的由PCV-2感染而引起PMWS病癥的患豬出現(xiàn)了CD8+T淋巴細(xì)胞的減少。而且有證據(jù)表明PCV-2在淋巴器官中的數(shù)量與患豬淋巴細(xì)胞的消耗以及外周血中IgM及CD8+T淋巴細(xì)胞的減少有著直接的關(guān)系。Nielsen等人報(bào)道，患豬在PCV-2感染10天后淋巴細(xì)胞開(kāi)始減少，在第14天時(shí)出現(xiàn)顯著下降，且這種下降會(huì)一直持續(xù)到患豬死亡。而且通過(guò)試驗(yàn)證實(shí)，所有的T淋巴細(xì)胞亞群都會(huì)由于PCV-2的感染而出現(xiàn)數(shù)量上的減少。Sarli等人報(bào)道，PCV-2對(duì)淋巴細(xì)胞的消耗還包括樹(shù)突狀細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，同時(shí)Chianini等人根據(jù)B淋巴細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞數(shù)量的下降程度，將其分為輕度損傷、中度損傷以及重度損傷，其中重度損傷可致淋巴細(xì)胞徹底消失。這充分說(shuō)明了PCV-2的感染可導(dǎo)致免疫機(jī)能下降，同時(shí)也為患豬由于PCV-2的感染并與其他病原體的并發(fā)感染而導(dǎo)致諸如PMWS一類疾病的發(fā)生提供了理論依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)，PCV-2的感染通常伴隨豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒(PRRSV)、豬細(xì)小病毒(PCV)、豬瘟病毒(CSFV)、卡氏肺囊蟲(chóng)(Pneumocystis?carinii)、衣原體(Chlamydia?spp.)、肺曲霉病(pulmonary?aspergillosis)、隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium?parvum)等共同感染而引起疾病的發(fā)生。其中PCV-2感染作為主要病因的疾病是豬斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合癥(Postweaning?Multisystemic?Wasting?Syndrome，PMWS)，在PCV-2感染的同時(shí)通常伴隨有PRRSV及PPV的感染，而且在實(shí)驗(yàn)室中PCV-2的單獨(dú)感染也可造成PMWS的典型癥狀。?