[發明專利]一種檢測抗U1-snRNP抗體的試劑裝置及其方法

有效

• 申請號: 201110451790.1
• 申請日: 2011-12-30
• 公開（公告）號: CN103185780A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 胡德明;劉清波;何林;陽輝
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 胡堅

技術領域

本發明申請涉及一種檢測抗U1-snRNP抗體的試劑裝置及其方法，屬于臨床免疫學檢測技術領域。

背景技術

混合性結締組織病(Mixed?connective?tissue?disease，MCTD)是一種以系統性紅斑狼瘡(SLE)，系統性硬化(SSc)，多發性肌炎/皮肌炎(PM/DM)及類風濕關節炎(RA)等疾病的癥狀相重疊為特征的風濕性綜合征，其突出的特點是在其血清中有很高滴度的斑點型抗核抗體(ANA)和抗U1-snRNP抗體。

在真核細胞，異質性胞核核糖核蛋白(hnRNP)與小核核糖核蛋白(snRNP)共同參與mRNA成熟的過程。snRNA是在真核細胞核內的一組小分子RNA，約含50～200個核苷酸，故稱為小核RNA。其與有關蛋白結合形成的snRNP，主要在加工RNA前體，切除多余的片段(如內含子)時發揮重要作用。由于這組小分子的snRNP中尿嘧啶含量豐富，故snRNP又被稱為U-snRNP?，F已發現，哺乳動物細胞中的U-snRNP至少有13種(U1～U13)，大都分布于核質。6種富含U的snRNA(U1～U6)大量存在于動物細胞核。每種snRNP均由1種snRNA(分別對應稱U1、U2、U4、U5和U6)與6～10個對應蛋白構成。

與U1-snRNP反應的抗體包括Sm抗體和RNP抗體。RNP抗體含有抗U1-snRNP抗體，抗U1-snRNP抗體陽性而抗Sm抗體陽性是MCTD的特點。但在患者血清中同時發現抗U1-snRNP抗體和抗Sm抗體的情況很多見，這可能與自身免疫擴展有關。

臨床檢測抗U1-snRNP抗體的常見方法包括免疫印跡法、對流免疫電泳法和ELISA法，但這些方法都存在著不足之處。

一、免疫印跡法

免疫印跡是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。其不足之處在于：

(1)只能進行定性和半定量分析，無法得出被檢物質具體的量。

(2)操作步驟繁瑣，試驗用時較長。

(3)檢測的靈敏度還有待提高。

二、對流免疫電泳法

對流免疫電泳是在瓊脂擴散基礎上結合電泳技術而建立的一種簡便而快速的方法。此方法能在短時間內出現結果，故可用于快速診斷。但其也存在著不足之處：

(1)當抗原抗體比例不適合時，均不能出現明顯可見的沉淀線；

(2)選擇不同的電泳緩沖液對其靈敏度有一定的影響；

(3)電壓和電流的選擇會干擾實驗結果。

三、酶聯免疫吸附法

酶聯免疫吸附法(ELISA)被廣泛應用于檢測抗U1-snRNP抗體，但該方法也存在著下述的不足之處：

(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；

(2)定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，加注試劑的操作也極為繁瑣；

(3)缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；

(4)檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；

(5)檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差；

(6)在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上均為項目數×48/96人份，如果需要檢測10個項目，則試劑的配置及使用數須為10×48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10個不同的項目，也需要配置10×48/96人份的試劑，存在著不夠經濟合理的缺點。

發明內容

本發明專利申請即是針對目前對于抗U1-snRNP抗體的檢測中存在的上述不足之處，提供一種能夠進行獨立單人份檢測的試劑裝置及其檢測方法。