[發明專利]豬肺炎支原體DJ-166株及其應用

有效

• 申請號: 201110450029.6
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN103184171A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發明（設計）人: 車艷杰;王海燕;王勇鶼;張鋒;高玉梅;趙亞榮
• 申請（專利權）人: 北京大北農科技集團股份有限公司;福州大北農生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K39/02;A61P31/04;G01N33/569;C12R1/35
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于獸醫微生物技術領域，特別涉及豬肺炎支原體DJ-166株及其應用。

背景技術

豬支原體肺炎又稱豬喘氣病，是由豬肺炎支原體引起的一種豬的接觸性慢性呼吸道疾病，呈世界普遍流行。據資料報道，世界各地分離的豬肺炎支原體均屬于同一血清型，但分離株之間抗原性有很大差異。1992年Frey首次證實了豬肺炎支原體分離株之間抗原性的差異；1996年，Artiushin和Minion進一步證實了Frey的觀點；1999年，Kokotovic也同樣證實了這一結論。因此，分離出一株抗原性較好的豬肺炎支原體菌株進行疫苗和診斷試劑盒應用，對防治豬支原體肺炎至關重要，特別是分離出一株適合制備滅活疫苗的菌株，將填補國內無自主研發豬喘氣病滅活疫苗的空白。

發明內容

本發明的目的在于提供一株新的抗原性好的豬肺炎支原體(Mycoplasma?hyopneumoniae)。

本發明的另一目的在于提供該株豬肺炎支原體在制備用于豬肺炎支原體感染引發疾病的預防用獸用生物制品或獸藥中的應用。

本發明還提供了該株豬肺炎支原體在制備疫苗或免疫診斷用試劑盒中的應用。

本發明的目的是通過如下技術方案實現的：

本發明提供一株豬肺炎支原體(Mycoplasma?hyopneumoniae)DJ-166株，其微生物保藏號為CGMCC?No.4545。

本發明的豬肺炎支原體DJ-166株可用于制備豬肺炎支原體感染引發疾病的預防用獸用生物制品或獸藥。

進一步，本發明的豬肺炎支原體DJ-166株可用于制備疫苗。

所述的疫苗包括：滅活疫苗、基因工程疫苗。

本發明的豬肺炎支原體DJ-166株也可用于制備免疫診斷用試劑盒。

所述的免疫診斷用試劑盒包括抗體檢測試劑盒、抗原檢測試劑盒。

有益效果

本發明的豬肺炎支原體DJ-166株CGMCC?No.4545為申請人自行分離得到，在制備的無細胞培養基中培養，活菌滴度可達10¹⁰～10¹¹CCU/ml，降低生產成本；其免疫原性好，平均肺炎病變減少率可達80％以上。

本發明的豬肺炎支原體(Mycoplasma?hyopneumoniae)DJ-166株為申請人從山西養豬場35日齡二元雜交病豬肺臟組織分離得到，以江蘇省地方標準(DB32/T?1461-2009)豬肺炎支原體檢測PCR法，設計引物擴增出特異性豬肺炎支原體P36基因片段，經過基因測序后，初步確定為豬肺炎支原體。然后又經多重PCR(豬鼻支原體、豬絮狀支原體和豬肺炎支原體)、培養特性、生化特性和血清學特性鑒定，證明為豬肺炎支原體，純凈。菌株在人工合成培養基傳8代穩定后，經過3次克隆純化后制備得到該株豬肺炎支原體。本發明的豬肺炎支原體(Mycoplasma?hyopneumoniae)DJ-166株申請人已于2011年01月19日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，簡稱CGMCC，郵編：100101，保藏編號為：CGMCC?No.4545。

附圖說明

圖1豬肺炎支原體DJ-166株PCR鑒定

其中，M：DNA標準DL?2000；1：DJ-166株擴增產物；2：陽性對照；3：陰性對照

圖2豬肺炎支原體DJ-166株多重PCR鑒定

其中，M：DNA標準DL?2000；1：陰性對照；2：豬肺炎支原體陽性對照；3：組織樣品(DJ-166株)；4：豬鼻支原體陽性對照；5：豬絮狀支原體陽性對照；6：豬鼻支原體、豬絮狀支原體和豬肺炎支原體陽性對照

圖3豬肺炎支原體DJ-166株菌落間接表面熒光試驗結果

具體實施方式

通過下列實施例將更具體說明本發明，但是應理解所述實施例僅是為了說明本發明，而不是以任何方式限制本發明的范圍。

實施例1本發明豬肺炎支原體DJ-166株分離鑒定

1培養基及其配制

液體培養基：

A液：腦心浸出液2.0g、PPLO肉湯5.0g、去離子水300ml

以上各成分混合，攪拌，使之完全溶解，116℃高壓滅菌20分鐘，冷卻后備用；