[發明專利]兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體的制備與應用

無效

• 申請號: 201110449770.0
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN102633879A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 王穎;沈一飛;郝柱;徐寧迎
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06;G01N33/68
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體的制備，其特征在于如下步驟：

步驟(1).經DNAStar軟件分析后，將人的α-乳清蛋白N端第122???????????????????????????????????????????????141位的20個氨基酸作為兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體抗原表位，氨基酸序列如下：

TyrTrpLeuAlaHisLysAlaLeuCysSerGluLysLeuAspGlnTrpLeuCysGluLys；

步驟(2).用多肽自動合成儀合成人的α-乳清蛋白多肽并純化，純化后與載體蛋白KLH偶聯，形成人的α-乳清蛋白多肽-KLH復合蛋白；

步驟(3).將人的α-乳清蛋白多肽-KLH復合蛋白乳化，乳化后在兔腹部皮下多點注射，先后注射三次，每次間隔710天；

步驟(4).第三次注射1012天后，收集、分離得到含有兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體的血清，ELISA檢測血清中兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體的效價，

所述的兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體，其效價在1:60000以上；

步驟(5).將步驟(2)合成并純化后的人的α-乳清蛋白多肽與溴化氰活化的Sepharose?4B偶聯，形成多肽親和層析柱；

步驟(6).將含有兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體的血清加入到步驟(5)制備的多肽親和層析柱中，并在4℃孵育過夜后，洗脫抗體，得到兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體；

所述的步驟(2)人的α-乳清蛋白多肽的純化，采用HPLC，可使人的α-乳清蛋白多肽的純度達到95%以上；

所述的步驟(6)中兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體的純化，采用免疫親和純化的方式。

2.根據權利要求1所述的兔抗人α-乳清蛋白多克隆抗體的制備后的應用，其特征在于：該抗體可與人乳腺細胞的α-乳清蛋白發生特異性結合反應，可用于western-blot、免疫組化試驗的要求。