[發(fā)明專利]一種高通量篩選細胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110449041.5
• 申請日: 2011-12-29
• 公開（公告）號: CN102533537A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙三軍;趙敏
• 申請（專利權(quán)）人: 云南師范大學(xué)
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種高通量篩選細胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法。??

背景技術(shù)

細胞的生長及遷移是眾多重要細胞生物學(xué)過程如個體發(fā)育、組織修復(fù)、器官再生、癌癥惡性轉(zhuǎn)移的重要步驟，細胞在二維的生長及遷移等行為與三維狀態(tài)有很大差異。目前，研究細胞的生長及遷移的裝置多是在二維平面裝置上進行，研究表明，在三維狀態(tài)培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生極化，且形成葡萄狀克隆，但是在二維狀態(tài)培養(yǎng)的細胞卻無此特征。此外，細胞在體內(nèi)狀態(tài)都是以三維形式存在，細胞外的各種基質(zhì)及環(huán)境都會影響細胞的生長及遷移等行為。因此細胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等更接近于細胞在體內(nèi)的狀態(tài)。目前尚無一種高通量篩選三維狀態(tài)下細胞生長及遷移等行為的裝置。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種高通量篩選細胞在三維基質(zhì)中生長遷移行為的裝置及方法，它克服了現(xiàn)有二維研究無法提供細胞在三維狀態(tài)生長及遷移等重要行為信息的不足，提供一種高通量三維篩選新裝置及方法，該裝置不僅實時監(jiān)測細胞在三維狀態(tài)的各種行為，而且能高通量篩選不同基質(zhì)、不同因子對細胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等重要行為的同時，方便、高效、高通量的篩選各類基質(zhì)對細胞行為的影響，并且該裝置價格低廉、結(jié)構(gòu)簡單。

為了解決背景技術(shù)所存在的問題，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：它的篩選裝置包含載玻片1、聚二甲基硅氧烷薄層2、蓋玻片3、膠條4、物鏡5、電動載物臺6和培養(yǎng)室平皿7，電動載物臺6的下方設(shè)置有物鏡5，電動載物臺6的上方設(shè)置有培養(yǎng)室平皿7，培養(yǎng)室平皿7內(nèi)底部設(shè)置有載玻片1，載玻片1上覆蓋有聚二甲基硅氧烷薄層2，聚二甲基硅氧烷薄層2上涂有細胞懸浮液層，細胞懸浮液層兩側(cè)設(shè)置有膠條4，膠條4上覆蓋有蓋玻片3。

它的篩選方法為：（1）先用聚二甲基硅氧烷覆蓋載玻片表面并在通風(fēng)櫥中靜置形成疏水界面，取50μl細胞懸液(濃度為10⁵?cell?ml^?1)與等體積基質(zhì)混勻；

（2）用微量移液器取10-20μl混合液，將細胞混合液依次均勻點至載玻片樣品觀察區(qū)域形成矩陣，以5×5矩陣為例，觀察區(qū)域為1.5cm，樣品直徑1.2mm，樣品間距約為3mm，單個樣品高度約為0.5mm，也可根據(jù)研究所需量身定制樣品觀察區(qū)從而形成數(shù)量不等的樣品矩陣；

（3）將矩陣靜置凝結(jié)，蓋上蓋玻片，然后置于配備電動載物臺的顯微鏡下，通過電動載物臺及物鏡定義每個矩陣點所在位置，通過自動照相系統(tǒng)每隔一定時間間隔獲取圖像，從而獲得細胞在各種三維基質(zhì)中的生長、遷移等狀態(tài)，并高通量篩選各種細胞外基質(zhì)對細胞生長、遷移等行為的影響。

本發(fā)明具有以下有益效果：它克服了現(xiàn)有二維研究無法提供細胞在三維狀態(tài)生長及遷移等重要行為信息的不足，提供一種高通量三維篩選新裝置及方法，該裝置不僅實時監(jiān)測細胞在三維狀態(tài)的各種行為，而且能高通量篩選不同基質(zhì)、不同因子對細胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等重要行為的同時，方便、高效、高通量的篩選各類基質(zhì)對細胞行為的影響，并且該裝置價格低廉、結(jié)構(gòu)簡單。

附圖說明：

圖1為本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明中載玻片的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實施方式：

參照圖1-2，本具體實施方式采取以下技術(shù)方案：它的篩選裝置包含載玻片1、聚二甲基硅氧烷薄層2、蓋玻片3、膠條4、物鏡5、電動載物臺6和培養(yǎng)室平皿7，電動載物臺6的下方設(shè)置有物鏡5，電動載物臺6的上方設(shè)置有培養(yǎng)室平皿7，培養(yǎng)室平皿7內(nèi)底部設(shè)置有載玻片1，載玻片1上覆蓋有聚二甲基硅氧烷薄層2，聚二甲基硅氧烷薄層2上涂有細胞懸浮液層，細胞懸浮液層兩側(cè)設(shè)置有膠條4，膠條4上覆蓋有蓋玻片3。

它的篩選方法為：（1）先用聚二甲基硅氧烷覆蓋載玻片表面并在通風(fēng)櫥中靜置形成疏水界面，取50μl細胞懸液(濃度約10⁵?cell?ml^?1)與等體積基質(zhì)混勻；

（2）用微量移液器取10-20μl混合液，將細胞混合液依次均勻點至載玻片樣品觀察區(qū)域形成矩陣，以5×5矩陣為例，觀察區(qū)域為1.5cm，樣品直徑1.2mm，樣品間距約為3mm，單個樣品高度約為0.5mm，也可根據(jù)研究所需量身定制樣品觀察區(qū)從而形成數(shù)量不等的樣品矩陣；

（3）將矩陣靜置凝結(jié)，蓋上蓋玻片，然后置于配備電動載物臺的顯微鏡下，通過電動載物臺及物鏡定義每個矩陣點所在位置，通過自動照相系統(tǒng)每隔一定時間間隔獲取圖像，從而獲得細胞在各種三維基質(zhì)中的生長、遷移等狀態(tài)，并高通量篩選各種細胞外基質(zhì)對細胞生長、遷移等行為的影響。

本具體實施方式克服了現(xiàn)有二維研究無法提供細胞在三維狀態(tài)生長及遷移等重要行為信息的不足，提供一種高通量三維篩選新裝置及方法，該裝置不僅實時監(jiān)測細胞在三維狀態(tài)的各種行為，而且能高通量篩選不同基質(zhì)、不同因子對細胞在三維狀態(tài)的生長及遷移等重要行為的同時，方便、高效、高通量的篩選各類基質(zhì)對細胞行為的影響，并且該裝置價格低廉、結(jié)構(gòu)簡單。