[發明專利]一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法

無效

• 申請號: 201110447585.8
• 申請日: 2011-12-28
• 公開（公告）號: CN102492036A
• 公開（公告）日: 2012-06-13
• 發明（設計）人: 李忠秋;孫金燕;彭福剛;陳赫書;馮艷忠;馬紅;付博;汪亮
• 申請（專利權）人: 黑龍江省農業科學院畜牧研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 韓末洙

技術領域

本發明涉及一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法。

背景技術

雞傳染性法氏囊病(IBD)是由病毒引起的一種主要危害雛雞的免疫抑制性傳染病，在養雞業中危害巨大。卵黃抗體(egg?yolk?antibodies，IgY)是指產蛋雞受特定抗原免疫后產生的特異性抗體，并轉移和貯存在卵黃中的免疫球蛋白。從含高效價抗體的雞蛋黃中提取、制備的IgY在人類和動物疾病的防治中具有特效作用。雞蛋提供了廉價易得的IgY來源，從一枚雞蛋中可獲得10～250mg?IgY。如何將大量的IgY提取、純化出來，是決定IgY能否被廣泛應用的一個重要前提。卵黃主要成分是水、蛋白質和脂肪，其中蛋白質與脂肪的比例約為1∶2，其中幾乎所有脂肪均與蛋白質結合形成脂蛋白。其中α、β、γ三種活性蛋白為水溶性蛋白，IgY是水溶性的γ活性蛋白。近年來，國內外學者對卵黃抗體的制備和應用做了大量研究。但由于高免卵黃提取過程中步驟繁瑣，不僅會使抗體效價降低，影響抗體的使用效果，而且造成成本提高；同時，由于大量雜蛋白及脂肪等物質未被除去，抗體純度低，造成注射困難、難以吸收、局部腫脹、過敏反應、保存和運輸不便等，導致治療效果不佳，限制了其在疾病防治上的應用。

發明內容

本發明是要解決現有卵黃抗體提取方法的步驟繁瑣，成本高，抗體效價低，抗體純度不高，治療效果不佳的問題，提供一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法。

本發明提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，按以下步驟進行：一、用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞，當雞蛋抗體效價達到1∶128時收集雞蛋，即為免疫雞蛋；二、從免疫雞蛋中分離卵黃，向卵黃中加入生理鹽水，使生理鹽水與卵黃的質量比為1～2∶1，攪拌均勻，得卵黃液；三、然后一邊攪拌一邊向卵黃液中加入碘酸鉀，使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到15％～25％；四、攪拌均勻后于室溫靜置6～8小時，然后放入固液分離離心機中，于12000r/min離心至無液體流出，獲得的淺黃色固體即為卵黃抗體；五、將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0.001％～0.005％蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到1∶64，將稀釋后的卵黃抗體用0.85μm的濾膜過濾，然后用0.45μm的濾膜過濾，再用0.22μm的濾膜過濾，即完成雞傳染性法氏囊卵黃抗體的提取。

本發明具有以下優點：

1、本發明方法簡化了操作程序，縮短了提取時間；

2、本方法由于使用價格低廉的提取原料，使得卵黃抗體提取成本較現有方法降低30％以上；

3、按照一定比例稀釋后，經瓊脂擴散法檢測抗體效價均可達到1∶64，較現有方法獲得的卵黃抗體效價顯著提高；

4、本發明獲得的抗體純度好，經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測后雜帶很少，抗體純度可達94％以上，幾乎完全去除了脂肪和雜蛋白，較現有方法獲得的卵黃抗體純度顯著提高；

5、注射時對雞體造成的損傷小，抗體吸收效果好。試驗雞經法氏囊攻毒2天后，用本發明提取的卵黃抗體進行治療，治療后4天的治愈率達95％以上，表明本發明提取的卵黃抗體對法氏囊病有很好的治療效果。

具體實施方式

本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。

具體實施方式一：本實施方式提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，按以下步驟進行：一、用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞，當雞蛋抗體效價達到1∶128時收集雞蛋，即為免疫雞蛋；二、從免疫雞蛋中分離卵黃，向卵黃中加入生理鹽水，使生理鹽水與卵黃的質量比為1～2∶1，攪拌均勻，得卵黃液；三、然后一邊攪拌一邊向卵黃液中加入碘酸鉀，使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到15％～25％；四、攪拌均勻后于室溫靜置6～8小時，然后放入固液分離離心機中，于12000r/min離心至無液體流出，獲得的淺黃色固體即為卵黃抗體；五、將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0.001％～0.005％蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到1∶64，將稀釋后的卵黃抗體用0.85μm的濾膜過濾，然后用0.45μm的濾膜過濾，再用0.22μm的濾膜過濾，即完成雞傳染性法氏囊卵黃抗體的提取。

本實施方式步驟一中雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗為購買得到。

具體實施方式二：本實施方式與具體實施方式一不同的是：步驟一中用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞的方法為：每次每只皮下注射1mL雞傳染性法氏囊疫苗，免疫3次，每次間隔14天。其它與具體實施方式一同。