[發(fā)明專利]APOE基因檢測試劑盒及擴(kuò)增方法和檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110446186.X
• 申請日: 2011-12-28
• 公開（公告）號: CN103184266A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓俊領(lǐng);杜宏偉;周毓玲;崔麗娟
• 申請（專利權(quán)）人: 協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司;天津濱海協(xié)和基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

1.一種APOE基因檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括檢測基因APOE?rs429358位點和rs7412位點的引物及內(nèi)參引物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的APOE基因檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括檢測APOE基因rs429358位點的兩個正向引物、APOE基因rs7412位點的兩個正向引物、APOE基因內(nèi)參上游引物及一個反向共用引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的APOE基因檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測APOE基因rs429358位點的引物堿基序列如下所示：

正向野生型引物：TGGGCGCGGACATGGAGGACGTGT

正向突變型引物：TGGGCGCGGACATGGAGGACGTGC

所述檢測APOE基因rs7412位點的引物堿基序列如下所示：

正向野生型引物：TCCGCGATGCCGATGACCTGCAGAAGC

正向突變型引物：TCCGCGATGCCGATGACCTGCAGAAGT

所述APOE基因內(nèi)參上游引物和共用下游引物：

正向內(nèi)參引物：CCGCAGGGCGCTGATGGACGAGACCATG

反向共用引物：CCCGCACGCGGCCCTGTTCCACCA。

4.一種權(quán)利要求1所述的APOE基因檢測試劑盒所采用的檢測方法，其特征在于，對受檢樣本DNA分別用野生型和突變擴(kuò)增緩沖液進(jìn)行擴(kuò)增，在每個反擴(kuò)增反應(yīng)中同時對2個目的片段和1個內(nèi)參片段進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增片段由大到小依次是：內(nèi)對照398bp，rs429358?264bp，rs7412?129bp；擴(kuò)增后經(jīng)凝膠電泳在紫外光下見到根據(jù)片段大小區(qū)分開的產(chǎn)物條帶，根據(jù)條帶的有無判斷2個SNP位點的基因型。

5.一種權(quán)利要求1所述的APOE基因檢測試劑盒的多重PCR擴(kuò)增方法，其特征在于，包括以下步驟：

預(yù)變性由1次循環(huán)構(gòu)成，其條件為：溫度為94℃，時間為5分鐘；

PCR擴(kuò)增由30次循環(huán)構(gòu)成，其條件為：

變性：溫度為94℃，時間為30秒；

退火：溫度為65℃，時間為30秒；

延伸：溫度為72℃，時間為90秒；

擴(kuò)增結(jié)束后于4℃保存至電泳檢測。