[發(fā)明專利]一種檢測苯乙醇胺A的直接競爭法酶聯(lián)免疫試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110445517.8
• 申請日: 2011-12-28
• 公開（公告）號: CN102539747A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于洪俠
• 申請（專利權(quán)）人: 于洪俠
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫和獸藥殘留檢測領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一種用于檢測苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒。

技術(shù)背景

苯乙醇胺A又稱為克侖巴胺(clenrapmine?CLRA)，學名為2-4-(4-硝基苯基)丁基-2-基氨基-1-甲氧基苯乙醇，是一種人工合成的化學物質(zhì)。克侖巴胺是福莫特羅的同分異構(gòu)體，是美國禮來公司合成萊克多巴胺的副產(chǎn)物，具有同瘦肉精和萊克多巴胺相同的作用和效果，屬于β2-激動劑的一種。被農(nóng)業(yè)部第1519號公告列為禁止在飼料和動物飲水中使用的物質(zhì)。因此必須建立檢測方法，禁止此類事件的發(fā)生，保障食品安全。

現(xiàn)有的苯乙醇胺A檢測方法多為色譜法，但是這些方法的靈敏度受樣品的凈化、濃縮等步驟的影響較大；再者這些方法需要復雜的儀器，且過程繁瑣，不適應現(xiàn)場大量樣本的篩查。基于抗原抗體免疫反應的免疫學檢測技術(shù)為苯乙醇胺A殘留物的分析檢測提供了篩查方法。該技術(shù)研究的關(guān)鍵是半抗原分子的設(shè)計、合成和人工全抗原及抗體的制備。

因為苯乙醇胺A是小分子化合物，本身沒有免疫原性，必須將其與大分子載體蛋白偶聯(lián)得到具有免疫原性的人工抗原。目前苯乙醇胺A的ELISA方法尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測苯乙醇胺A的酶聯(lián)免疫試劑盒。

本發(fā)明提供了一種快速檢測苯乙醇胺A的直接競爭法酶聯(lián)免疫試劑盒，該試劑盒包括：包被有苯乙醇胺A特異性抗體的酶標板、苯乙醇胺A-辣根過氧化物酶標記物。其中苯乙醇胺A特異性抗體為兔抗苯乙醇胺A的多克隆抗體，可用苯乙醇胺A與載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原通過免疫動物(例如兔、羊、鼠等)制得。所述的載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或鑰孔銅蘭蛋白(KLH)。所述的苯乙醇胺A-辣根過氧化物酶標記物采用化學方法將苯乙醇胺A與辣根過氧化物酶偶聯(lián)得到。

用于制備所述酶標板的固相材料，包括但不限于，例如，聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯。載體的形式是微量反應板凹孔。

為方便現(xiàn)場檢測和大量樣本篩查，所述試劑盒還可以進一步包括苯乙醇胺A-辣根過氧化物工作液、苯乙醇胺A標準溶液、顯色劑、洗滌液、終止液和濃縮樣品稀釋液。

所述的洗滌液為0.05％-0.5％吐溫-20磷酸鹽緩沖液。所述的顯色劑由顯色劑A液和顯色劑B液組成(例如，體積比為1∶1)，顯色劑A液為過氧化氫或過氧化脲，顯色劑B液為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺。所述的濃縮樣品稀釋液為含0.1％吐溫-20的磷酸鹽緩沖液。

另一方面，本發(fā)明還提供了一種檢飼料測樣品中苯乙醇胺A含量的方法，包括步驟：

(1)樣品前處理；

(2)用權(quán)利要求1-7任一所述的試劑盒進行檢測，向包被有苯乙醇胺A抗體的酶標板孔中加入標準品或樣品溶液，再加入苯乙醇胺A-辣根過氧化物工作液，孵育后洗滌拍干，加入顯色劑，孵育后終止，用酶標儀測定吸光度值；

(3)分析檢測結(jié)果。

本發(fā)明試劑盒的檢測原理為：

將苯乙醇胺A抗體吸附于固相載體上，加入樣本或苯乙醇胺A標準品溶液并加入苯乙醇胺A-辣根過氧化物工作液，待測樣品中苯乙醇胺A和苯乙醇胺A-辣根過氧化物競爭酶標板上的苯乙醇胺A抗體，顯色后終止，測定樣品的吸光度值，該值與樣品中苯乙醇胺A的量呈負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出苯乙醇胺A濃度范圍。

有益效果：

本發(fā)明檢測苯乙醇胺A的試劑盒主要采用直接競爭酶聯(lián)免疫測定法，定性或定量測定樣品中苯乙醇胺A含量；對樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡單，能同時快速檢測大批樣品。

本發(fā)明該試劑盒采用高特異性的苯乙醇胺A多克隆抗體，主要試劑以工作液形式提供，可以減少試劑盒的操作步驟，為使用者節(jié)省時間并降低因操作步驟冗繁造成的誤差，本發(fā)明具有靈敏度高、特異性強、高精確度、高準確度、對儀器設(shè)備要求低、試劑保存時間長、自動化程度高、無放射性同位素污染的等優(yōu)點，可在飼料及動物源性產(chǎn)品檢測中發(fā)揮重要作用。

附圖說明

附圖為苯乙醇胺A抑制曲線。

具體實施方案

提供下述實施例是為了更好地進一步理解本發(fā)明，而決不對本發(fā)明的內(nèi)容和保護范圍構(gòu)成任何限制。

實施例1?免疫原的合成及免疫血清的制備

1.1?試劑與儀器