[發明專利]一種對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201110445128.5
• 申請日: 2011-12-27
• 公開（公告）號: CN102533992A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 盛司潼
• 申請（專利權）人: 盛司潼
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A.利用PAH基因特異性引物，對待測樣品中的多個目標區域進行擴增，并基于擴增產物構建測序文庫；

B.對測序文庫進行單分子擴增，得到與所述多個目標區域對應的多個單分子擴增產物；

C.同時對所述多個單分子擴增產物進行高通量基因測序，得到所述多個目標區域的序列信息。

2.根據權利要求1所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的方法，其特征在于，所述步驟A包括以下步驟：

A1.利用PAH基因特異性引物，對待測樣品中的多個目標區域進行擴增，得到與所述多個目標區域對應的擴增產物；

A2.利用接頭元件，與所述多個目標區域對應的擴增產物進行連接，得到測序文庫；所述接頭元件采用平末端接頭、突出末端接頭、帶莖環結構的接頭和分叉接頭中的至少一種。

3.根據權利要求2所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的方法，其特征在于，所述步驟A2包括以下步驟：

A21.對與所述多個目標區域對應的擴增產物進行片段化，得到片段化產物；

A22.利用接頭元件，與所述片段化產物進行連接，構建測序文庫。

4.根據權利要求3所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的方法，其特征在于，所述步驟A22包括以下步驟：

A221.利用第一接頭與片段化產物的兩端連接，得第一連接產物；

A222.環化第一連接產物，得環化產物；

A223.II?s型限制性內切酶酶切環化產物，得酶切產物；

A224.在酶切產物兩端接上第二接頭和第三接頭，得測序文庫。

5.根據權利要求3所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的方法，其特征在于，所述步驟A22包括以下步驟：

A221’.利用第四接頭與片段化產物連接，得第二連接產物；

A222’.II?s型限制性內切酶酶切第二連接產物，得帶有第四接頭的酶切片段；

A223’.帶有第四接頭的酶切片段與第五接頭連接，形成測序文庫。

6.根據權利要求2至5任一項所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的方法，其特征在于，步驟A2所述的接頭元件中的至少一個接頭包含有第一標簽序列，用于在文庫構建過程中，對不同待測樣品的測序文庫進行標記。

7.根據權利要求1至5任一項所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的方法，其特征在于，每個目標區域對應的特異性引物中，至少有一條引物與該目標區域部分互補，該部分互補的引物的5’端包含有第二標簽序列，用于在擴增目標區域過程中，對不同待測樣品的目標區域擴增產物進行標記。

8.一種對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的試劑盒，其特征在于，包括：

PAH基因特異性引物，用于對待測樣品中的多個目標區域進行擴增；

接頭元件，用于與擴增產物結合構建測序文庫。

9.根據權利要求8所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的試劑盒，其特征在于，所述接頭元件采用平末端接頭、突出末端接頭、帶莖環結構的接頭和分叉接頭中的至少一種。

10.根據權利要求8所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的試劑盒，其特征在于，所述接頭元件中的至少一個接頭包含有第一標簽序列，用于在文庫構建過程中，對不同待測樣品的測序文庫進行標記。

11.根據權利要求8至10任一項所述的對苯丙氨酸羥化酶基因進行測序的試劑盒，其特征在于，每個目標區域對應的特異性引物中，至少有一條引物與該目標區域部分互補，該部分互補的引物的5’端包含有第二標簽序列，用于在擴增目標區域過程中，對不同待測樣品的目標區域擴增產物進行標記。