[發(fā)明專(zhuān)利]乳腺癌變前期mRNA水平原位雜交檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110443904.8
• 申請(qǐng)日: 2011-12-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102533990A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裘霖;張玉麗;裘建英;張?jiān)聘?/a>
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 芮屈生物技術(shù)（上海）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽;施春花

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，是涉及與乳腺癌前變的mRNA表達(dá)改變(病理演變過(guò)程)的相關(guān)檢測(cè)技術(shù)。??

背景技術(shù)

根據(jù)國(guó)內(nèi)外權(quán)威機(jī)構(gòu)提供的資料，我國(guó)每年癌癥的新增人數(shù)260萬(wàn)，死亡人數(shù)近210萬(wàn)，患者700多萬(wàn)，全球每年新增癌癥患者800萬(wàn)，死亡人數(shù)接近800萬(wàn)，患者約有8400多萬(wàn)人，到2020年以上人數(shù)將翻一番，這是一組可怕的數(shù)字。癌癥診治成本越來(lái)越高，按癌癥患者的年治療費(fèi)用20萬(wàn)（貧窮地區(qū)可能偏高，發(fā)達(dá)地區(qū)可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出20萬(wàn)），700多萬(wàn)患者，每年的花費(fèi)是1.4萬(wàn)億，扣除成本35%約4千億，每年約有1萬(wàn)億人民幣白白消耗了。而且，癌癥患者大部分會(huì)在治療后不久死亡。因此，現(xiàn)有的臨床癌癥診治模式一定要改變，本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)是提前做到預(yù)防性篩查，然后及時(shí)介入預(yù)防性調(diào)控和預(yù)防性治療，做到基因水平癌癥的治未病。

2005年美國(guó)衛(wèi)生研究院、癌癥研究院、疾控中心等八家單位做了一個(gè)年度報(bào)告，對(duì)1972年發(fā)起的抗癌大戰(zhàn)進(jìn)行回顧，報(bào)告認(rèn)為人類(lèi)在抗癌大戰(zhàn)中是失敗，結(jié)論是癌癥死亡率沒(méi)有降低，其列舉出造成抗癌大戰(zhàn)失敗的幾個(gè)因素是：1.腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性（多態(tài)性）；2.腫瘤細(xì)胞耐藥性；3.抗癌藥物設(shè)計(jì)思路不完善（動(dòng)物模型設(shè)計(jì)不科學(xué)）等。同時(shí)，該報(bào)告中亦提出應(yīng)重新審視現(xiàn)有診治癌癥的措施。

本發(fā)明人在長(zhǎng)期研究中發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致癌癥死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期診斷。依照現(xiàn)有的臨床醫(yī)學(xué)影像（B超、CT、核磁共振成像等）及和其它生化（癌抗原、癌胚抗原、糖類(lèi)激素、細(xì)胞膜因子、細(xì)胞核因子、細(xì)胞流式技術(shù)）指標(biāo)來(lái)診斷癌癥，都是腫瘤形成后診斷，前者要有組織學(xué)變化或已有占位性病變，后者大部分是腫瘤形成后所分泌、釋放、或腫瘤的標(biāo)記物。傳統(tǒng)臨床觀念認(rèn)為占位性癌塊在2公分下是屬于早期癌癥的診斷，這一概念值得認(rèn)真討論，2公分以下癌塊屬早期這一界定科學(xué)性是不夠嚴(yán)謹(jǐn)?shù)模瑥募?xì)胞學(xué)角度來(lái)分析，1公分的腫塊約有一億個(gè)腫瘤細(xì)胞，2公分的腫塊其三維空間的細(xì)胞疊加數(shù)遠(yuǎn)不止2億個(gè)腫瘤細(xì)胞，從癌變前期到單克隆癌細(xì)胞產(chǎn)生及形成2公分的癌塊，其病理演變過(guò)程相當(dāng)長(zhǎng)，可能是5年或10年、甚至是10年以上（特殊病例除外），很難證實(shí)的是在這個(gè)病理演變過(guò)程中，腫塊是癌癥唯一的發(fā)生地和單獨(dú)的病灶，可能癌細(xì)胞早已遷移到其它組織或器官生長(zhǎng)。臨床研究早已證實(shí)，一旦形成腫塊的同時(shí)，其它癌細(xì)胞通過(guò)不同途徑遷移到其它部位克隆生長(zhǎng)，一旦切除原發(fā)灶后，其它器官?gòu)?fù)發(fā)灶或多發(fā)癌塊灶先后形成。因此，在臨床上以2公分以下的癌腫塊大小來(lái)界定早期與否，不夠嚴(yán)謹(jǐn)（有些病例，在發(fā)現(xiàn)原發(fā)病灶時(shí)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶，不在我們表述的內(nèi)容中），其實(shí)這時(shí)已經(jīng)是晚期診斷和晚期治療，這是導(dǎo)致癌癥死亡率不降的真正原因。

隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)，癌癥基因組學(xué)等研究的深入展開(kāi)，為了尋求更早期的診斷癌癥、治療癌癥、以及預(yù)防癌癥，已取得長(zhǎng)足進(jìn)步。至今，我們已有可能在基因的一級(jí)轉(zhuǎn)錄功能產(chǎn)物（mRNA水平）上做更精確的早期篩查和診斷，在癌變前期或癌細(xì)胞形成（單克?。┣?就可以做到早期預(yù)測(cè)和篩查。本發(fā)明采用核酸原位雜交技術(shù)，選擇多組臨床標(biāo)本（癌癥病人、高危人群、家屬史人群、正常對(duì)照），對(duì)ZNF703基因與乳腺癌的早期預(yù)警進(jìn)行檢測(cè)分析。

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，這種疾病通常發(fā)生在乳房腺上皮組織，發(fā)病率占各種惡性腫瘤的7-10%，是一種嚴(yán)重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見(jiàn)惡性腫瘤之一。中國(guó)女性乳腺癌的發(fā)病率越來(lái)愈高，越來(lái)越年輕。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)全球每年約有120萬(wàn)婦女被確診患乳腺癌。在我國(guó)，乳腺癌已成為現(xiàn)代女性的“頭號(hào)殺手”?！霸谇闆r最為嚴(yán)重，每300名女性就有1名乳腺癌患者，發(fā)病率居全國(guó)第一?！睂?zhuān)家表示，壓力大、吸煙飲酒、晚睡晚起、缺乏足夠運(yùn)動(dòng)、使用含雌激素的補(bǔ)品化妝品、晚育以及生養(yǎng)后不哺乳等因素，讓職業(yè)女性如教師、辦公族、企業(yè)家成為乳腺癌高發(fā)人群，她們得癌的比例約占女性乳腺癌患者的40?！斑^(guò)往10年中，全世界乳腺癌發(fā)病率年增8%。ZNF703是這五年來(lái)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)（乳腺癌）致癌基因。在平均12個(gè)乳腺細(xì)胞中有一個(gè)細(xì)胞會(huì)高度活化，這就是英國(guó)每年高達(dá)4000例乳腺癌的原因所在。致癌基因是一種在正常情況下有助于指導(dǎo)健康細(xì)胞正常分裂的基因，但一旦它高度活化，它將會(huì)擾亂細(xì)胞分裂過(guò)程的正常的中止與平衡。這種危害被描述成是“像一輛汽車(chē)的油門(mén)被粘住了”，細(xì)胞和其子細(xì)胞將永遠(yuǎn)分裂下去。