[發(fā)明專利]癌癥病變前期mH2A的mRNA水平原位雜交檢測試劑盒及檢測方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110442998.7
• 申請日: 2011-12-27
• 公開（公告）號: CN102559886A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 裘霖;張玉麗;裘建英;張云福
• 申請（專利權(quán)）人: 芮屈生物技術(shù)（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽;施春花

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，更具體地說，是涉及與黑色色癌病理演變mRNA表達(dá)改變(病理演變過程)的相關(guān)檢測技術(shù)。

背景技術(shù)

根據(jù)國內(nèi)外權(quán)威機(jī)構(gòu)提供的資料，我國每年癌癥的新增人數(shù)260萬，死亡人數(shù)近210萬，患者700多萬，全球每年新增癌癥患者800萬，死亡人數(shù)接近800萬，患者約有8400多萬人，到2020年以上人數(shù)將翻一番，這是一組可怕的數(shù)字。癌癥診治成本越來越高，按癌癥患者的年治療費(fèi)用20萬（貧窮地區(qū)可能偏高，發(fā)達(dá)地區(qū)可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出20萬），700多萬患者，每年的花費(fèi)是一點(diǎn)四萬億人民幣，扣除成本35%約四千億，每年約有一萬億人民幣白白消耗了。而且，癌癥患者大部分會在治療后不久死亡。因此，現(xiàn)有的臨床癌癥診治模式一定要改變，本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)是提前做到預(yù)防性篩查，然后及時介入預(yù)防性調(diào)控和預(yù)防性治療，做到基因水平癌癥的治未病。

2005年美國衛(wèi)生研究院、癌癥研究院、疾控中心等八家單位做了一個年度報告，對1972年發(fā)起的抗癌大戰(zhàn)進(jìn)行回顧，報告認(rèn)為人類在抗癌大戰(zhàn)中是失敗，結(jié)論是癌癥死亡率沒有降低，其列舉出造成抗癌大戰(zhàn)失敗的幾個因素是：1.腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性（多態(tài)性）；2.腫瘤細(xì)胞耐藥性；3.抗癌藥物設(shè)計思路不完善（動物模型設(shè)計不科學(xué)）等。同時，該報告中亦提出應(yīng)重新審視現(xiàn)有診治癌癥的措施。

本發(fā)明人在長期研究中發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致癌癥死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期診斷。依照現(xiàn)有的臨床醫(yī)學(xué)影像（B超、CT、核磁共振成像等）及和其它生化（癌抗原、癌胚抗原、糖類激素、細(xì)胞膜因子、細(xì)胞核因子、細(xì)胞流式技術(shù)）指標(biāo)來診斷癌癥，都是腫瘤形成后診斷，前者要有組織學(xué)變化或已有占位性病變，后者大部分是腫瘤形成后所分泌、釋放、或腫瘤的標(biāo)記物。傳統(tǒng)臨床觀念認(rèn)為占位性癌塊在2公分下是屬于早期癌癥的診斷，這一概念值得認(rèn)真討論，2公分以下癌塊屬早期這一界定科學(xué)性是不夠嚴(yán)謹(jǐn)?shù)模瑥募?xì)胞學(xué)角度來分析，1公分的腫塊約有一億個腫瘤細(xì)胞，2公分的腫塊其三維空間的細(xì)胞疊加數(shù)遠(yuǎn)不止2億個腫瘤細(xì)胞，從癌變前期到單克隆癌細(xì)胞產(chǎn)生及形成2公分的癌塊，其病理演變過程相當(dāng)長，可能是5年或10年、甚至是10年以上（特殊病例除外），很難證實(shí)的是在這個病理演變過程中，腫塊是癌癥唯一的發(fā)生地和單獨(dú)的病灶，可能癌細(xì)胞早已遷移到其它組織或器官生長。臨床研究早已證實(shí)，一旦形成腫塊的同時，其它癌細(xì)胞通過不同途徑遷移到其它部位克隆生長，一旦切除原發(fā)灶后，其它器官復(fù)發(fā)灶或多發(fā)癌塊灶先后形成。因此，在臨床上以2公分以下的癌腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴(yán)謹(jǐn)（有些病例，在發(fā)現(xiàn)原發(fā)病灶時，同時發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶，不在我們表述的內(nèi)容中），其實(shí)這時已經(jīng)是晚期診斷和晚期治療，這是導(dǎo)致癌癥死亡率不降的真正原因。

隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)，癌癥基因組學(xué)等研究的深入展開，為了尋求更早期的診斷癌癥、治療癌癥、以及預(yù)防癌癥，已取得長足進(jìn)步。至今，我們已有可能在基因的一級轉(zhuǎn)錄功能產(chǎn)物（mRNA水平）上做更精確的早期篩查和診斷，在癌變前期或癌細(xì)胞形成（單克隆）前,就可以做到早期預(yù)測和篩查。本發(fā)明采用核酸原位雜交技術(shù)，選擇多組臨床標(biāo)本（癌癥病人、高危人群、正常對照），對MH2A基因與肝癌轉(zhuǎn)移的早期預(yù)警進(jìn)行檢測分析。

組蛋白變體mH2A基因被發(fā)現(xiàn)在很多黑素瘤中表達(dá)水平降低。mH2A的失去通過CDK8的轉(zhuǎn)錄上調(diào)促進(jìn)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，而CDK8是一個已知的致癌基因。因此，這項(xiàng)研究揭示了一個由染色質(zhì)修飾所施加的新的腫瘤抑制機(jī)制癌癥是一種遺傳和表觀遺傳學(xué)變化疾病，盡管越來越多的證據(jù)顯示腫瘤發(fā)生發(fā)展需要染色質(zhì)介導(dǎo)的變化，如DNA甲基化，但組蛋白變體在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用目前還不清楚。組蛋白變體在核小體內(nèi)替代傳統(tǒng)的組蛋白，并把獨(dú)特的生物功能傳遞給染色質(zhì)。

紐約西奈山醫(yī)學(xué)院的Avnish?Kapoor等報道了組蛋白變體macroH2A?(mH2A)抑制惡性黑色素瘤發(fā)展的研究。缺少mH2A亞型，組蛋白變體一般與染色質(zhì)相關(guān)并微調(diào)發(fā)育基因表達(dá)程序。在低度惡性黑色素瘤細(xì)胞中敲掉mH2A亞型導(dǎo)致細(xì)胞在體外的增殖和遷移，以及在體內(nèi)的生長和轉(zhuǎn)移。恢復(fù)mH2A亞型的表達(dá)可以在體內(nèi)和體外挽救這些惡性表型。研究表明缺少mH2A的腫瘤促進(jìn)作用是通過直接轉(zhuǎn)錄上調(diào)CDK8介導(dǎo)的，起碼是部分介導(dǎo)的。CDK8是一種大腸癌基因，抑制CDK8可以抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖，敲掉CDK8耗盡mH2A可以抑制因mH2A丟失而引起的增殖優(yōu)勢。而且黑色素瘤患者存在mH2A?和CDK8表達(dá)水平之間明顯的負(fù)相關(guān)。該研究表明mH2A是抑制惡性黑色素瘤發(fā)展的一個關(guān)鍵染色質(zhì)成份。