[發(fā)明專利]快速檢測(cè)軟骨藻酸的試劑盒及其使用方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110442476.7
• 申請(qǐng)日: 2011-12-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102539746A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程金平;王茜;唐慶麗;余朝毅;皮帥帥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國(guó)中

1.一種快速檢測(cè)軟骨藻酸的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：酶標(biāo)板、酶標(biāo)抗原、稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液，所述酶標(biāo)抗原為軟骨藻酸與辣根過(guò)氧化物酶的偶聯(lián)物，所述酶標(biāo)板已用抗軟骨藻酸的抗體包被、并用封閉液封閉。

2.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述的試劑盒快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一，取已用抗軟骨藻酸的抗體包被、并用封閉液封閉的酶標(biāo)板，每孔加入軟骨藻酸與辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)形成的酶標(biāo)抗原，并分別加入已知不同濃度的軟骨藻酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，同時(shí)在其余孔內(nèi)加入待測(cè)樣品，溫育，洗滌液洗滌，拍干；

步驟二，每孔加入顯色液，顯色，加入終止液終止反應(yīng)，測(cè)定OD值；

步驟三，繪制所述已知不同濃度的軟骨藻酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的對(duì)數(shù)值和相應(yīng)的結(jié)合率的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

步驟四，將所述待測(cè)樣品的OD值帶入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求得樣品中軟骨藻酸的濃度。

3.如權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，所述軟骨藻酸與辣根過(guò)氧化物酶的偶聯(lián)通過(guò)碳化二亞胺法完成。

4.如權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，待測(cè)樣品進(jìn)行測(cè)定前進(jìn)行預(yù)處理，該預(yù)處理步驟包括：取樣品，加入勻漿液，勻漿后，漩渦振蕩，超聲提取，離心，取出上清液至容量瓶，剩余殘?jiān)偌尤雱驖{液，重復(fù)提取，上清液均移至容量瓶中，蒸餾水定容，濾膜過(guò)濾。

5.如權(quán)利要求4所述的快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，所述離心為4000rpm離心20min。

6.如權(quán)利要求4所述的快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，所述重復(fù)提取的次數(shù)為2次。

7.如權(quán)利要求4所述的快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，所述濾膜的孔徑為0.22μm。

8.如權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，所述溫育的溫度為37℃，時(shí)間為60min。

9.如權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，所述包被用的抗體為抗軟骨藻酸單克隆抗體，4℃包被過(guò)夜。

10.如權(quán)利要求2所述的快速檢測(cè)軟骨藻酸的方法，其特征在于，所述封閉液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的明膠，37℃封閉60min制成封閉好的酶標(biāo)板。