[發明專利]一種海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5及其基因、分離純化、化學合成和應用

有效

• 申請號: 201110441909.7
• 申請日: 2011-12-26
• 公開（公告）號: CN102516382A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 于海寧;王義鵬;馮菲菲;廣慧娟;何偉玉
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/20;C07K1/16;C12N15/12;A61K38/17;A61K48/00;A61P31/00
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 梅洪玉

1.一種海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5，其特征在于，是一種從海南湍蛙皮膚分泌液中分離出來的C端含有七元Rana?Box的環狀多肽，分子量為2337.91道爾頓，等電點為10.11，多肽全序列一級結構為：苯丙氨酸丙氨酸亮氨酸甘氨酸丙氨酸纈氨酸蘇氨酸賴氨酸精氨酸亮氨酸脯氨酸絲氨酸亮氨酸苯丙氨酸半胱氨酸亮氨酸異亮氨酸蘇氨酸精氨酸賴氨酸半胱氨酸。

2.一種海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5的分離純化方法，其特征在于，電刺激海南湍蛙收集皮膚分泌液離心去除沉淀，冷凍干燥后經Sephadex?G-50凝膠過濾柱層析和反相高壓液相色譜后分離純化后得到。

3.一種海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5的化學合成方法，其特征在于，根據編碼海南湍蛙(Amolops?hainanensis)抗菌肽Hainanenin-5成熟肽的氨基酸序列，用自動多肽合成儀合成其全序列；通過HPLC反相柱層析脫鹽純化，并確定其純度大于95％；用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)測定其分子量。

4.一種海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5的基因，其特征在于，編碼海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5前體的基因由321個核苷酸組成，自5’端至3’端序列為：

??1ATGTTCACCA?TGAAGAAATC?CATGTTACTC?CTTTTCTTCC?TTGGGACCAT?CAACTTATCT

?61CTCTGTGAGC?AACAGAGAGA?TGCCGAAGAA?GAAAGAAGAG?ACGATGAAGA?TAAAAGGGAT

121GTTGAAGTGG?AAAAACGATT?TGCATTAGGT?GCGGTTACTA?AGCGTTTGCC?ATCACTGTTT

181TGTTTGATTA?CCAGAAAATG?TTGAAGCTTG?AGCTGGAAAT?CATCTGATGA?GAAATATAAT

241TTAGCTAAAT?GCACATCAGA?TATCTTATAA?AAAATAAAAA?TTCTCACATG?CAAAAAAAAA

301AAAAAAAAAA?AAAAAAAAAA?A

編碼海南湍蛙(Amolops?hainanensis)成熟肽Hainanenin-5為第139-201位核苷酸，其氨基酸序列為：Phe¹Ala²Leu³Gly⁴Ala⁵Val⁶Thr⁷Lys⁸Arg⁹Leu¹⁰Pro¹¹Ser¹²Leu¹³Phe¹⁴Cys¹⁵Leu¹⁶Ile¹⁷Thr¹⁸Arg¹⁹Lys²⁰Cys²¹(FALGAVTKRLPSLFCLITRKC)。

5.權利要求1的海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5具有抗微生物感染的作用，能夠作為制備病原微生物感染疾病的治療藥物。

6.權利要求3所述的海南湍蛙抗微生物肽Hainanenin-5基因的應用，其特征在于，Hainanenin-5抗微生物肽具有很強的抗微生物作用，溶于滅菌超純水，用于藥理活性檢測。