[發(fā)明專利]一種篩選高效降解茶籽餅粕的微生物菌株的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110441651.0
• 申請(qǐng)日: 2011-12-26
• 公開（公告）號(hào): CN102517380A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林元山;劉來壯;吳永堯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 林元山
• 主分類號(hào): C12Q1/37
• 分類號(hào): C12Q1/37;C12Q1/34;C12Q1/04;C12N1/00;A23K1/14
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1.一種篩選高效降解茶籽餅粕的微生物菌株的方法，其特征包括以下幾個(gè)步驟：

⑴?高濃度茶皂素耐受菌株的篩選：配制高濃度茶籽餅粕固體培養(yǎng)基,?按重量百分比取茶籽餅粕10%~15%、瓊脂1.5%~2.0%，水85%~90%，?pH自然，120~130℃滅菌20~30?min，利用該培養(yǎng)基篩選高濃度茶皂素耐受菌株，編號(hào)，供進(jìn)一步獲得高蛋白酶活性菌株的篩選使用；

⑵?高蛋白酶活性菌株的篩選：配制干酪素固體培養(yǎng)基,?按重量百分比取干酪素1.0%~2.0%、葡萄糖2.0%~4.0%，瓊脂1.5%~2.0%，水85%~90%，pH?5~7，120~130℃滅菌20~30?min，利用該培養(yǎng)基從高濃度茶皂素耐受菌株中進(jìn)一步篩選出高蛋白酶活性菌株，編號(hào)，供進(jìn)一步篩選高纖維素酶活性菌株的篩選使用；

⑶?高纖維素酶活性菌株的篩選：配制羧甲基纖維素固體培養(yǎng)基,?按重量百分比取羧甲基纖維素1.0%~1.5%、蛋白胨0.3%~0.5%，瓊脂1.5%~2.0%，水85%~90%，pH?5~7，120~130℃滅菌20~30?min，利用該培養(yǎng)基從高濃度茶皂素耐受菌株、且具有高蛋白酶活性菌株中進(jìn)一步篩選出高纖維素酶活性菌株，編號(hào)，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獲得茶皂素高耐受性、高蛋白酶活性以及高纖維素酶活性菌株，用于搖瓶發(fā)酵降解茶籽餅粕進(jìn)一步復(fù)篩：其特征包括：復(fù)篩培養(yǎng)基按重量百分比取茶籽餅粕2%~5%、含水重量為93%~97%，pH自然，100?mL若干瓶，置于250?mL三角瓶，120~130℃滅菌20~30?min，分別接種步驟⑶獲得菌株，200~300?r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)72~84?h，選擇茶皂素含量低、游離氨基酸含量高、還原糖含量高、粗蛋白降解率高、粗纖維降解率高、蛋白酶活力高、纖維素酶活力高的菌株，編號(hào)，作為茶籽餅粕發(fā)酵的生產(chǎn)菌種，4℃冰箱保存，備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的獲得茶皂素高耐受性、高蛋白酶活性以及高纖維素酶活性菌，用于降解茶籽餅粕的方法，其特征在于：

①?菌種制備：按重量百分比取茶籽餅粕2%~5%、麩皮1%~2%，含水重量為93%~97%，pH自然，120~130℃滅菌20~30?min，接種步驟⑶獲得菌株，200?~300?r/min條件下，搖床振蕩培養(yǎng)24~36?h，使該種子培養(yǎng)液中菌體濃度達(dá)到10⁸~10⁹cfu/mL，作為茶籽餅粕發(fā)酵的生產(chǎn)菌種；

②?茶籽餅粕固體發(fā)酵降解：按重量百分比取茶籽餅粕40%~50%、含水重量為50%~60%，120~130℃滅菌30~40min制成茶籽餅粕固體發(fā)酵培養(yǎng)基；再將步驟①獲得菌株以1%~3%的接種重量接種到該茶籽餅粕固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合均勻，堆積成高0.5~0.8m，長度不限的壟堆，上面覆蓋草簾，45℃~55℃下發(fā)酵5~10天，干燥后即得脫毒且降解了的固體茶籽餅粕；

③?茶籽餅粕液體發(fā)酵降解：按重量百分比取茶籽餅粕10%~15%、含水重量為85%~90%，于100L~1000?L發(fā)酵罐中，120~130℃滅菌30~40?min制成茶籽餅粕液體發(fā)酵培養(yǎng)基；再將步驟①獲得菌株以1%~3%的接種重量接種到裝有該茶籽餅粕液體發(fā)酵罐中，32~37℃下通風(fēng)發(fā)酵4~6天，濃縮后即得脫毒且降解了的茶籽餅粕水解液。