[發明專利]一種篩查牛退化性軸突病攜帶者的方法及其試劑盒

無效

• 申請號: 201110440150.0
• 申請日: 2011-12-26
• 公開（公告）號: CN102424847A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 黃金明;王秀革;王長法;鞠志花;李秋玲;齊超;張燕;趙秀新;李榮嶺;李建斌;楊宏軍;王玲玲;仲躋峰
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院奶牛研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種篩查牛退化性軸突病攜帶者的方法，其特征在于以待測牛的基因組DNA為模板，設計上游引物和下游引物對其進行PCR擴增反應，然后回收PCR擴增片段，用FastDigest限制酶TspRI進行酶切，在酶切反應體系酶切后進行凝膠檢測，酶切后凝膠檢測酶切DNA片段為307bp的待測牛為正常牛；酶切后DNA片段為307bp、225bp和82bp的檢測測牛為退化性軸突病攜帶者；酶切后DNA片段為225bp和82bp的檢測牛為患退化性軸突病牛。

2.一種篩查牛退化性軸突病攜帶者所設計的PCR擴增引物，其特征在于根據NCBI中MFN2基因序列設計上游引物MFN2F序列為：SEQ?ID?NO.1，下游引物MFN2R序列為：SEQ?ID?NO.2。

3.根據權利要求1所述的一種篩查牛退化性軸突病攜帶者的方法，其特征在于PCR擴增反應采用25μl?PCR擴增反應體系為：模板DNA(100ng/μl)1μl，上游引物MFN2F、下游引物MFN2R各(10μmol/L)0.5μl，2×Taq?PCRMasterMix?12.5μl，用雙蒸水(ddH₂O)補至25μl。

4.根據權利要求1所述的一種篩查牛退化性軸突病攜帶者的方法，其特征在于PCR擴增反應條件為：94℃變性4min；然后94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，這一步共35個循環；72℃保持10min；4℃保存。

5.根據權利要求1所述的一種篩查牛退化性軸突病攜帶者的方法，其特征在于酶切反應體系采用15μl?TspRI酶切反應體系為：PCR擴增產物5μl；10×FastDigest緩沖液1μl；FastDigest限制酶TspRI?0.5μl；ddH₂O?8.5μl，酶切反應條件為：65℃消化30min。

6.根據權利要求1所述的一種篩查牛退化性軸突病攜帶者的方法，其特征在于酶切片段用質量濃度為3.0～4.0％瓊脂糖凝膠電泳。

7.一種篩查牛退化性軸突病攜帶者的試劑盒，其特征在于：該試劑盒是：上、下游引物(10μmol/L)；2×Taq?PCR?MasterMix；10×FastDigest緩沖液；FastDigest限制酶TspRI；雙蒸水(ddH₂O)；50bp?DNA?Ladder?Marker中的一種以上數量的試劑。