[發明專利]一種檢測植物乳桿菌ST-Ⅲ的PCR檢測方法及其引物和試劑盒

有效

• 申請號: 201110439177.8
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號: CN102533790A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 陳臣;任婧;周方方;艾連中
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

1.一種植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)ST-III菌株的遺傳標記分子，其特征在于，所述的遺傳標記分子是編碼植物乳桿菌ST-III的KilA結構域蛋白的基因的第1位至第867位所示序列的核苷酸中連續的242-867個。

2.如權利要求1所述的遺傳標記分子，其特征在于，所述的遺傳標記分子的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1的第360位至第601位所示。

3.一種檢測植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum)ST-III菌株的引物對，其特征在于，該引物對中，一條引物和植物乳桿菌ST-III菌株的遺傳標記分子的序列相同，引物長度為15-40bp；另一條引物和植物乳桿菌ST-III菌株的遺傳標記分子的序列互補，引物長度為15-40bp，該引物對的擴增片段為200-867bp。

4.如權利要求3所述的引物，其特征在于，所述的引物對中，一條引物的序列如SEQ?ID?NO.2所示，另一條引物的序列如SEQ?ID?NO.3所示。

5.一種檢測植物乳桿菌ST-III菌株的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括如權利要求3或4所述的引物。

6.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括dNTP，10×PCR緩沖液和Taq?DNA聚合酶。

7.一種植物乳桿菌ST-III菌株的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)提取待測樣品菌株DNA；

2)以步驟1)所得菌株DNA為模板，以權利要求3或4所述引物對進行PCR反應；

3)將步驟2)所得PCR反應產物進行電泳檢測，具有權利要求3或4所述引物擴增出的片段的樣品中存在植物乳桿菌ST-III菌株。

8.如權利要求7所述的植物乳桿菌ST-III菌株的檢測方法，其特征在于，步驟2)所述的PCR反應體系中包括0.25mmol/L的上游引物，0.25mmol/L的下游引物，0.2mmol/L的dNTP，1×PCR?buffer，1.0mmol/L的Mg²⁺，0.02U/μL的Taq?DNA聚合酶，1.0-2.0ng/μL的DNA模板。

9.如權利要求7所述的植物乳桿菌ST-III菌株的檢測方法，其特征在于，步驟2)所述的PCR反應程序為：95℃，5min；40個循環95℃40S，58℃30S，72℃30S；72℃，8min；4℃保存。

10.如權利要求1所述的遺傳標記分子作為植物乳桿菌ST-III菌株的特征序列在檢測植物乳桿菌ST-III菌株中的應用。