[發明專利]少孢節叢孢菌菌株N及其應用

無效

• 申請號: 201110438117.4
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號: CN102604838A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 王軍;楊曉野;王瑞;楊蓮茹
• 申請（專利權）人: 內蒙古大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N13/00;C12N15/01;A23K1/16;A01N63/04;A01P5/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，涉及一種具有捕食線蟲能力的少孢節叢孢菌(Arthrobotrys?oligospora)菌株N及其應用。

背景技術

寄生蟲病特別是寄生性線蟲病目前依然是嚴重危害畜牧業發展的大敵。對這類病原生物的防治主要依靠抗蠕蟲化學藥物，但長期頻繁的使用化學驅蟲藥物不可避免地產生了耐藥性、藥物殘留和生態環境污染等方面的問題。為了解決化學驅蟲藥物防治家畜寄生性線蟲病所帶來的上述弊端，促進畜牧業的可持續發展，迫切需要尋求新的家畜線蟲病防治方法。目前，研究最多、最深入且最有應用前景的就是利用寄生性線蟲的自然天敵-捕食線蟲性真菌進行生物防治。

捕食線蟲性真菌最初是一類纖維素裂解菌，生活在高碳氮比的環境中，為了獲取活性氮而捕食線蟲或其他微小動物。少孢節叢孢菌(Arthrobotrys?oligospora)是節叢孢屬真菌，將少孢節叢孢菌孢子投服給家畜，在家畜糞便中少孢節叢孢菌的孢子能夠發芽，在糞便中家畜寄生性線蟲第三期幼蟲的誘發下生長發育，捕食家畜寄生性線蟲第三期幼蟲，從而可有效地預防家畜寄生性線蟲病的發生。但是現有少孢節叢孢菌繁殖形成孢子的速度較慢，5～7d后孢子才開始產生，大量產生則要到3周后，產孢子量較少，而厚垣孢子產生的時間更長，產量也很少，捕食線蟲第3期幼蟲的捕食率約為80％，這在一定程度上阻礙了少孢節叢孢菌的推廣應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種生長繁殖快、始發產孢子時間早、產孢子數量多、吞噬線蟲幼蟲能力強的少孢節叢孢菌菌株及其應用。

本發明的技術方案為以少孢節叢孢菌為出發菌，通過低能氮離子束注入的誘變技術，改進少孢節叢孢菌菌株，通過實驗室生物測定的方法篩選該菌種的生長速度快、早產及高產孢子、捕食線蟲第3期幼蟲能力強的突變菌株，通過實驗動物消化道試驗，得到低能氮離子束誘變少孢節叢孢菌菌株N(Arthrobotrys?oligospora?N)，并確定菌株遺傳穩定性。

本發明提供的真菌菌株為少孢節叢孢菌株N，該菌株于2011年11月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，分類名少孢節叢孢，拉丁學名Arthrobotrysoligospora，保藏編號為CGMCC?No.5508。

本發明提供的少孢節叢孢菌菌株N(Arthrobotrys?oligospora?N)，屬于半知菌綱，節叢孢屬。需氧或耐氧。生長適宜溫度15℃～35℃。適宜pH5～8，以微酸性環境中生長最好。接種于0.4g/L玉米粉瓊脂培養基上，置25℃±1℃溫箱中培養。有菌絲和孢子2種形態。其菌絲發達無色，呈密集的絲狀體，菌絲主要在瓊脂表面生長，也可深入到內部。光鏡下菌絲上隔不明顯，表現為菌絲上間隔不等距離有發亮點。菌絲寬度在3μm～7μm之間，每天菌絲生長速度平均約10mm/d。培養4～5d后出現垂直生長的分生孢子梗，開始產分生孢子，大量產孢子在12～15d左右。分生孢子梗長而直立不分枝，在梗的游離端或接近梗的上部，密集的分生孢子圍繞著分生孢子梗呈輪狀排列，一般為2輪或以上，密集成簇狀。分生孢子光滑、無色，每個分生孢子呈倒卵形，形態豐滿，沒有顏色，游離端大而鈍圓，連接分生孢子梗基部的一端小而稍尖，大小約為16.7μm～25.2μm×4.9μm～9.9μm，橫隔將分生孢子分成兩部分，呈雙孢體形態。

本發明提供了含有少孢節叢孢菌株N的菌劑。

本發明提供了少孢節叢孢菌株N或含有少孢節叢孢菌株N的菌劑在制備防治寄生蟲藥物中的應用。

所述的寄生蟲為線蟲。

本發明提供了少孢節叢孢菌株N或含有少孢節叢孢菌菌株N的菌劑在制備飼料添加劑中的應用。

本發明提供了少孢節叢孢菌株N在防治寄生蟲上的應用。

本發明提供了少孢節叢孢菌株N在防治線蟲第3期幼蟲上的應用。

本發明提供少孢節叢孢菌株N的檢定方法是：將捕食性真菌少孢節叢孢菌的分生孢子擴大培養，收集分生孢子，稀釋后涂于一次性滅菌塑料培養皿中，干燥后進行低能氮離子束注入，劑量為90×2.6×10¹³～170×2.6×10¹³N⁺ions/cm²；將菌絲生長速度大于9.19mm/天，3天后能產生分生孢子，2周后產孢子量達到高峰的少孢節叢孢菌作為正突變株。