[發明專利]一種美味牛肝菌菌體中水溶性活性多糖的制備方法及應用

無效

• 申請號: 201110437103.0
• 申請日: 2011-12-23
• 公開（公告）號: CN102517354A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 張華山;王偉平;陳維
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C08B37/00;A61K31/715;A61P31/04;C12R1/645
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明屬于生物工程與技術領域，更具體涉及一種美味牛肝菌菌體中水溶性活性多糖的制備方法。還涉及一種美味牛肝菌多糖在抗菌中的用途，多糖可廣泛應用于醫藥、食品等工業上做抗菌劑的原料。

背景技術

美味牛肝菌又稱大腳菇、白牛肝菌，是擔子菌亞門，層菌綱，傘菌目，牛肝菌科的一種，主要分布于我國河南、臺灣、黑龍江、四川、貴州、云南、西藏、內蒙古、福建等地區。是一種可食用真菌，其營養物質豐富，含有多種維生素，氨基酸，多糖和礦物質。該菌具有降血脂，提高免疫力等功效。此外，其水提物對小白鼠肉瘤S-180的抑制率為100％，對艾氏腹水癌的抑制率為90％。目前部分研究集中在馴化菌種和人工栽培子實體，但由于人工栽培技術不足，加上栽培困難，生長周期長，易受季節控制。使得其子實體活性物質產量低，難以推廣。而采用深層發酵制備菌絲體可以克服以上不足。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種美味牛肝菌菌體中水溶性活性多糖的制備方法，方法易行，操作簡便，低溫、短時、高效，制取的多糖具有較好的抗菌性。

現有的具有抗菌性的多糖多為從植物中所提取的如：香菇子實體，紫莖澤蘭，烏飯樹樹葉，山莓葉，蒲公英，微藻等中提取多糖。與這些植物多糖相比，本發明通過發酵法得到的多糖具有周期短、方便生產、不受季節限制等優點。本發明的另一個目的是在于提供了一種美味牛肝菌菌體中水溶性活性多糖在制備治療或預防細菌藥物中的應用，其主要優點在于該多糖是一種可食用可藥用的水溶性多糖。

一種美味牛肝菌菌體中水溶性活性多糖的制備方法，其步驟是：

美味牛肝菌菌體的制備方法

方法A

(1)將美味牛肝菌(編號ACCC50559，由中國農業微生物菌種保藏中心提供)接種于固體斜面培養基，于25℃恒溫培養6天，得到斜面種子。固體斜面培養基為(％)：馬鈴薯18-24，葡萄糖1.0-3.0，酵母粉1.0-2.0，瓊脂1.5-2.5，蛋白胨0.4-0.6，磷酸二氫鉀0.05-0.15，七水硫酸鋅0.03-0.07。

(2)取培養后的斜面4-5環(用接種環在斜面上取菌種4-5環)接種到一級液體種子培養基，在250ml三角瓶，裝液量為100ml，加10顆玻璃珠，于120r/min，25℃培養60小時。所述的培養基中各組分及其含量分別為(％)：馬鈴薯18-24，葡萄糖1.0-3.0，酵母粉1.0-2.0，瓊脂1.5-2.5，蛋白胨0.4-0.6，磷酸二氫鉀0.05-0.15，七水硫酸鋅0.03-0.07。

(3)將培養60h后的一級液體種子按10％的接種量接種到二級液體種子，在250ml三角瓶，裝液量為100ml，加10顆玻璃珠，于28℃，150r/min培養40h。所述的培養基與一級液體種子相同。

(4)將培養40h后的二級液體種子按5％的接種量接種發酵，在250ml三角瓶，裝液量為100ml，于28℃，180r/min培養98h。所述的發酵培養基成分為(％)：馬鈴薯8-12，蔗糖1-3，蛋白胨0.4-0.8，磷酸二氫鉀0.2-0.4，七水硫酸鎂0.1-0.3，碳酸鈣0.1-0.3。

(5)將菌絲體與發酵液分離，清水沖凈，于50℃烘干后研磨得到菌絲體干粉。以上培養基pH均為自然pH。

方法B

步驟(1)-(3)與方法A中(1)-(3)相同

(4)將培養40h后的二級液體種子按5％的接種量接種發酵，在250ml三角瓶，裝液量為100ml，于28℃，180r/min培養98h。所述的發酵培養基成分為(％)：酵母膏0.8-1.2，蛋白胨1.8-2.2，葡萄糖1.8-2.2。

(5)將菌絲體與發酵液分離，清水沖凈，于50℃烘干后研磨得到菌絲體干粉。以上培養基pH均為自然pH。

美味牛肝菌提取方法

方法A

(1)將美味牛肝菌菌絲體磨碎，加入去離子水進行超聲，濃縮液體，加入乙醇沉淀收集美味牛肝菌多糖粗沉淀物；

(2)美味牛肝菌粗多糖沉淀物用水溶解，再用sevag法反復除去游離的蛋白質，直到檢測不到蛋白質，濃縮，用乙醇沉淀，得到去蛋白后的美味牛肝菌多糖沉淀物；

(3)去蛋白后的美味牛肝菌多糖沉淀物經透析的方法分離，除去小分子雜質，得到多糖分子量在2500-8000道爾頓之間的美味牛肝菌多糖精制提取液，濃縮，加入乙醇沉淀，得到精制沉淀物

(4)美味牛肝菌多糖精制沉淀物經干燥得到美味牛肝菌多糖精制提取物；

方法B