[發明專利]EXO1基因的用途

無效

• 申請號: 201110436930.8
• 申請日: 2011-12-22
• 公開（公告）號: CN103173528A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 黃健;劉星
• 申請（專利權）人: 上海生物芯片有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/574
• 代理公司: 上海序倫律師事務所 31276
• 代理人: 周東萍

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種EXO1基因的用途。

背景技術

EXO1基因(又名HEX1，NM_003686)位于染色體1q42-43區段，編碼92KD蛋白，屬于RAD2蛋白家族，包含RAD2保守結構域，功能上具有5’-3’DNA外切酶活性和RNase?H活性。其同源蛋白Exo1在線蟲中與DNA錯配修復相關蛋白Msh2互作，并參與DNA錯配重組修復過程。EXO1被發現在細胞分裂S期與增殖細胞核抗原PCNA共定位于細胞核，提示其既可能作為結構特異性核酸酶FEN1的同工酶去除RNA模板，也可能通過參與DNA錯配修復的重合成及重合成前步驟來實現其在DNA修復過程中的作用。

DNA錯配修復被認為是維持基因組完整性的重要機制，相關通路的失活是導致腫瘤發生的原因之一，如hMSH2，hMSH6，hMLH1和hPMS2等基因突變會導致遺傳性非肌肉病性結直腸癌(HNPCC)，提示參與此過程的相關蛋白可能在腫瘤發生過程中發揮重要作用。在非典型HNPCC中，一些EXO1基因突變，如V27A，E109K，L410R，和P770L被發現特異性地出現在病人組樣本中。此外，EXO1基因的R354H、E670G位點的多態性則被分別認為與胰腺癌和肺癌病人的預后相關。

目前尚沒有關于EXO1基因作為肝癌診斷標志物的報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種EXO1基因的用途，EXO1基因可作為診斷肝癌的分子標志物。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現：

在本發明的一個方面，提供了一種EXO1基因的用途，用于制備診斷肝癌的產品。

優選的，所述診斷肝癌的產品包括：用半定量RT-PCR、基因芯片檢測、或免疫檢測診斷肝癌的產品。

所述用半定量RT-PCR診斷肝癌的產品至少包括一對特異擴增EXO1基因的引物。

所述用基因芯片檢測診斷肝癌的產品包括：與EXO1基因的核酸序列雜交的探針。

所述用免疫檢測診斷肝癌的產品包括：與EXO1蛋白特異性結合的抗體。

在本發明的另一方面，還提供了一種用于診斷肝癌的試劑盒，所述試劑盒包含特異性針對EXO1基因的引物或探針，或包含特異性結合EXO1蛋白的抗體。

利用本發明的試劑盒，可以檢測病人EXO1基因的表達情況，從而診斷病人是否患有肝癌。

在本發明中，術語“引物”是指一種寡核苷酸，可以是天然的也可以是合成的，它可以作為在一定條件下誘發DNA合成的起始點，在合適條件下誘發合成與核酸鏈互補的引物擴增產物，即在四種不同的三磷酸脫氧核糖核苷及一種聚合試劑(即DNA聚合酶或逆轉錄酶)存在下，在一種合適的緩沖液中并在合適的溫度下進行擴增反應。優選的引物是單股寡脫氧核糖核苷酸。引物的合適長度取決于該引物的設計用途，但一般在15～25個核苷酸之間。

在本發明中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合，任何長度都可以。

在本發明中，可以使用一系列本領域已知的方法來制備針對EXO1蛋白特異的抗體。例如，將提純的人EXO1基因產物或它的抗原片段或人工合成的含有與EXO1蛋白有連續5個相同的氨基酸的多肽片段注射入動物體內以產生多抗體。同樣，表達人EXO1蛋白或它的抗原片段的細胞也可以用來對動物致免疫而產生抗體。根據本發明制備的抗體也可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤技術制備。

經實驗證明，本發明EXO1基因在肝癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，因此EXO1基因可作為診斷肝癌的特異標志基因，使肝癌診斷更加準確、快速。

附圖說明

下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步詳細的說明。

圖1是本發明實施例1的EXO1基因在人肝癌組織和癌旁組織中差異表達的半定量RT-PCR結果圖。

具體實施方式

下列實施例中，未注明具體條件的實驗方法，通常按常規條件，如《精編分子生物學實驗指南》(F.M.奧斯伯，R.E.金斯頓，J.G.塞德曼等主編，馬學軍，舒躍龍的譯.北京：科學出版社，2004)中所述的方法進行。

實施例1用半定量RT-PCR方法檢測肝癌樣本中EXO1基因的表達變化